TY - JOUR AU - พยุงวงษ์, ธงชัย AU - อุทัยดา, สุกัลยา AU - อุทัยพิบูลย์, ชัยรัตน์ PY - 2015/02/17 Y2 - 2024/03/28 TI - การแสดงออกของโปรตีนไดไฮโดรโฟเลตซินเทส-โฟลีลโพลีกลูตาเมตซินเทสของ Plasmodium falciparum โดยใช้ระบบการแสดงออก pGEX JF - Thai Journal of Science and Technology JA - Thai J. Sci. Technol. VL - 4 IS - 1 SE - วิทยาศาสตร์ชีวภาพ DO - 10.14456/tjst.2015.13 UR - https://li01.tci-thaijo.org/index.php/tjst/article/view/31061 SP - 64-74 AB - <p><strong>บทคัดย่อ</strong><strong></strong></p><p>เอนไซม์ไดไฮโดรโฟเลตซินเทส-โฟลีลโพลีกลูตาเมตซินเทส (dihydrofolate synthase - folylpolygluta-mate synthase) เป็นเอนไซม์ในวิถีโฟเลตซึ่งเป็นวิถีสำคัญในการสังเคราะห์สารพันธุกรรมของมาลาเรีย <em>Plasmodium falciparum</em> และเป็นเอนไซม์สำคัญที่จะนำมาใช้เป็นเป้าหมายในการพัฒนายาต้านมาลาเรีย ดังนั้นการแสดงออกและผลิตเอนไซม์ไดไฮโดรโฟเลตซินเทส-โฟลีลโพลีกลูตาเมตซินเทสของ <em>P. falciparum</em> จึงมีความจำเป็นเพื่อใช้ในการศึกษาและพัฒนายาให้สามารถจับกับเอนไซม์ได้อย่างจำเพาะ งานวิจัยที่ผ่านมาพบว่าสามารถทำให้มีการสร้างเอนไซม์ไดไฮโดรโฟเลตซินเทส-โฟลีลโพลีกลูตาเมตซินเทสของ<em> P. falciparum</em> ในแบคทีเรีย <em>Eschelichia coli </em>ได้ แต่พบปัญหาคือโปรตีนส่วนใหญ่อยู่ในส่วนของโปรตีนที่ไม่ละลายน้ำ ดังนั้นในงานวิจัยนี้ ผู้วิจัยใช้ระบบ pGEXเพื่อทำการแสดงออกเอนไซม์ไดไฮโดรโฟเลตซินเทส-โฟลีลโพลีกลูตาเมต ซินเทสของ<strong> </strong><em>P. falciparum</em> เชื่อมต่อกับกลูตาไธโอน เอส-ทรานสเฟอเรส (glutathione S-transferase) ใน <em>E. coli </em>BL21(DE3) โดยกระตุ้นการแสดงออกของโปรตีนด้วยการใช้สูตรอาหารกระตุ้นการแสดงออกอัตโนมัติ ZYM-5052 ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 12 ชั่วโมง และนำไปกระตุ้นต่อที่อุณหภูมิ 18 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ได้โปรตีนไดไฮโดรโฟเลตซินเทส-โฟลีลโพลีกลูตาเมตซินเทสของ<em> P. falciparum </em>เชื่อมต่อกับกลูตาไธโอน เอส-ทรานสเฟอเรสที่มีขนาดประมาณ 87 กิโลดาลตัน ในส่วนละลายน้ำ และสามารถทำให้บริสุทธิ์เบื้องต้นได้ด้วย glutathione sepharose 4 fast flow resin เพื่อนำไปใช้ในการศึกษาพัฒนายาต้านมาลาเรียต่อไปได้</p><p><strong>คำสำคัญ : </strong>มาลาเรีย;<em> Plasmodium falciparum</em>; ไดไฮโดรโฟเลตซินเทส-โฟลีลโพลีกลูตาเมตซินเทส; การแสดงออกของโปรตีน</p><p> </p><p><strong>Abstract</strong></p><p>Dihydrofolate synthase-folylpolyglutamate synthase (DHFS-FPGS) is one of the enzymes in folate biosynthesis pathway, which is important for genetic material synthesis in malarial parasite <em>Plasmodium falciparum</em>. Due to its important function in the pathway, the enzyme is considered to be one of the candidates as new drug targets. Therefore, expression and production of <em>P. falciparum</em> DHFS-FPGS enzyme is crucial for use in specific inhibitor-target binding during the process of drug discovery and development. Previous studies by other research groups showed that <em>P. falciparum</em> DHFS-FPGS could be expressed in <em>Escherichia coli </em>but most of the expressed proteins were in the form of insoluble fraction. In this study, we used pGEX expression system to express Glutathione S-transferase (GST)-fusion DHFS-FPGS protein in <em>E. coli </em>BL21 (DE3). The GST-fusion DHFS-FPGS protein, at the size of approximately 87 kilodaltons, could be induced as a soluble form, using autoexpression system by culturing the bacteria in ZYM-5052 media at 37 °C for 12 hours followed by 18 °C for another 24 hours. When purified using glutathione Sepharose 4 Fast Flow resin, the protein could be further used for antimalarial drug development.</p><p><strong>Keywords: </strong><em>Plasmodium falciparum</em>; dihydrofolate synthase-folylpolyglutamate synthase; protein expression</p> ER -