การปรับปรุงวิธีการตรวจแบบทำให้เกิดสีของวิธี Loop Mediated Isothermal Amplification เพื่อตรวจหาเชื้อมัยโคแบคทีเรียม ทิวเบอร์คิวโลสิส
คำสำคัญ:
วัณโรคบทคัดย่อ
หลักการและวัตถุประสงค์: วัณโรคมีสาเหตุจากเชื้อมัยโคแบคทีเรียม ทิวเบอร์คิวโลสิส (Mycobacterium tuberculosis) เป็นปัญหาหลักทางสาธารณสุขของไทยและทั่วโลก นอกจากนี้ยังเป็นสาเหตุการตายอันดับที่สองของการเสียชีวิตจากโรคติดเชื้อทั่วโลก การพัฒนาการตรวจวินิจฉัยวัณโรคเป็นปัจจัยสำคัญอย่างหนึ่งในการควบคุมวัณโรค การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อปรับการตรวจวัดด้วยสีให้เหมาะสมที่สุดในขั้นตอนการตรวจวัดหลังการเพิ่มปริมาณ DNA ด้วยเทคนิค Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) ซึ่งเป็นวิธีที่สะดวกและรวดเร็วในการตรวจวินิจฉัย
วิธีการศึกษา: ได้ใช้เทคนิค LAMP เพื่อใช้ในการตรวจหาดีเอ็นเอของเชื้อ มัยโคแบคทีเรียม ทิวเบอร์คิวโลสิส ในขั้นตอนการตรวจหาผลผลิตของการเพิ่มจำนวนดีเอ็นเอ มีการใช้ Hydroxy naphthol blue (HNB), Sybergreen (SYBR) และ gel electrophoresis มีการปรับปริมาณและวิธีการใช้ HNB เปรียบเทียบผลจากการใช้ SYBR และ gel electrophoresis
ผลการศึกษา: การใช้ HNB ในการเติมล่วงหน้าก่อนปฏิกิริยาเพิ่มจำนวนดีเอ็นเอ ความเข้มข้นที่เหมาะสมคือ 5 mM โดยผลบวกจะมีการเปลี่ยนสีจากสีม่วงเป็นสีฟ้าและไม่รบกวนปฏิกิริยา การตรวจหาปริมาณ DNA ของเชื้อ MTB ในระดับต่ำสุด ระหว่างการใช้ HNB, SYBR และ gel electrophoresis คือ 10, 100 และ 10 pg ตามลำดับ
สรุป: การตรวจแบบทำให้เกิดสีของวิธี LAMP โดยใช้ HNB ได้รับการปรับให้เหมาะสมสำหรับการตรวจหาเชื้อMTB ความเข้มข้นที่เหมาะสมของ HNB คือ 5mM และตรวจหาปริมาณ DNAของเชื้อ MTB ในระดับต่ำสุดที่ 10 pg ซึ่งคล้ายกับ gel electrophoresis
เอกสารอ้างอิง
2. Goto M, Honda E, Ogura A, Nomoto A, Hanaki K. Colorimetric detection of loop-mediated isothermal amplification reaction by using hydroxy naphthol blue. Biotechniques 2009; 46: 167-172.
3. Balne, Praveen K, Barik, Manas R, Sharma, Savitri, et al. Development of a Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay Targeting the (mpb64) Gene for Diagnosis of Intraocular Tuberculosis. Clinical Microbiology 2013; 51: 3839-3840.
4. Tyagi JS, Sharma D. Signal transduction systems of mycobacteria with special reference to M-tuberculosis. Current Science 2004; 86: 93-102.
5. Neonakis IK, Gitti Z, Krambovitis E, Spandidos DA. Molecular diagnostic tools in mycobacteriology. J Microbiol Methods 2008; 75: 1-11.
