การคัดเลือกไพรเมอร์และตรวจสอบเพศอินทผลัมด้วยเทคนิคพีซีอาร์

บทคัดย่อ

อินทผลัม (Phoenix dactylifera L.) เป็นพืชไม่สมบูรณ์เพศ มีการเจริญเติบโตช้าและใช้ระยะเวลานานกว่าจะผสมพันธุ์ได้ การออกดอกต้องใช้ระยะเวลาปลูกตั้งแต่ต้นกล้านาน 3-7 ปี จึงจะทราบเพศ การทดลองนี้จึงได้ศึกษาเครื่องหมายดีเอ็นเอและการตรวจสอบเพศอินทผลัมในระยะต้นกล้าด้วยเทคนิคพีซีอาร์ โดยทดสอบไพรเมอร์ตามรายงานและออกแบบขึ้นมาใหม่ จำนวน 39 คู่ไพรเมอร์ พบว่า คู่ไพรเมอร์ DpDOAmale5F และ DpDOAmale5R ที่ออกแบบขึ้นมาใหม่สามารถแยกเพศอินทผลัมได้ด้วยเทคนิคพีซีอาร์ โดยแสดงแถบดีเอ็นเอเฉพาะในต้นตัวผู้มีขนาดประมาณ 450 คู่เบส การพัฒนาวิธีการตรวจสอบเพศอินทผลัมด้วยวิธีการสกัดดีเอ็นเอแบบรวดเร็วที่บดด้วยเม็ดลูกเหล็ก พบมีความบริสุทธิ์เทียบเท่ากับการสกัดด้วยวิธี CTAB ที่บดด้วยไนโตรเจนเหลว สามารถลดปริมาณการใช้สารเคมีและระยะเวลาในการสกัดดีเอ็นเอลงได้ การทดสอบความจำเพาะของเครื่องหมายโมเลกุลกับต้นอินทผลัมที่ทราบเพศแล้ว ได้แก่ พันธุ์ KL1 และพันธุ์บาฮี พบมีความจำเพาะที่ 100 เปอร์เซ็นต์ เมื่อนำมาตรวจสอบเพศจากต้นกล้าพันธุ์ KL1 และบาฮี ที่เพาะจากเมล็ดอายุ 4-12 เดือน จำนวน 483 ตัวอย่าง พบมีอัตราส่วนต้นตัวผู้ถึง 42 เปอร์เซ็นต์ อย่างไรก็ตามเครื่องหมายดีเอ็นเอที่ได้จากการทดลองนี้สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการตรวจสอบเพศในระยะต้นกล้า เพื่อลดระยะเวลาและค่าใช้จ่ายในการดูแลรักษาแปลงปลูกอินทผลัมได้