การพัฒนาชุดตรวจสอบอิมมูโนสตริปสำหรับตรวจแบคทีเรีย Xanthomonas campestris pv. campestris สาเหตุโรคเน่าดำคะน้า

บทคัดย่อ

การพัฒนาชุดตรวจสอบอิมมูโนสตริป สหรับตรวจวินิจฉัยแบคทีเรีย Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) สาเหตุโรค เน่าดำของคะน้า มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาชุด ตรวจวินิจฉัยโรคโดยใช้หลักการทางเซรุ่มวิทยาร่วม กับเทคนิค lateral flow assay เพื่อให้ได้ชุดตรวจ สอบที่มีความแม่นยำ รวดเร็ว เกษตรกรหรือบุคคล ทั่วไปสามารถนำไปใช้งานในภาคสนามได้จริงอย่าง มีประสิทธิภาพ โดยนำโปรตีนจากเซลล์แบคทีเรีย ได้แก่ Membrane protein complex เป็นแอนติเจน ในการฉีดกระต่ายเพื่อผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดี ที่มีความจำเพาะต่อแบคทีเรีย Xcc ผลการทดสอบ ประสิทธิภาพของโพลีโคลนอลแอนติบอดีที่ผลิต ได้พบว่า มีความจำเพาะต่อแบคทีเรีย Xcc สามารถ นำไปพัฒนาเป็นชุดตรวจอิมมูโนสตริปได้จึงเลือก ใช้โพลีโคลนอลแอนติบอดีที่มีค่าไตเตอร์สูงสุด คือ 1:128,000 ในการเตรียมอิมมูโนโกลโบลิน ให้บริสุทธิ์ (IgG-Xcc) โดยวิธีการตกตะกอนด้วย สารละลายเกลือแอมโมเนียมซัลเฟตอิ่มตัว จากนั้น นำไปติดฉลากด้วยอนุภาคทองที่ปรับความเข้มข้น ให้มีค่าการดูดกลืนแสงเท่ากับ 0.5 ที่ช่วงคลื่น แสง 540 นาโนเมตร สำหรับใช้ทาบน conjugate release pad (nitrocellulose membrane ชนิด S&S-AE 99) เพื่อประกอบเป็นชุดตรวจสอบ ใน การทำ control line ใช้goat anti IgG และ ใช้ IgG-Xcc ในการทำ test line ผลการทดสอบ ประสิทธิภาพของชุดตรวจสอบอิมมูโนสตริป พบว่ามีความจำเพาะต่อแบคทีเรีย Xcc สาเหตุโรค เน่าดำของคะน้า มีความไวในการตรวจแบคทีเรีย ได้ปริมาณต่ำสุดที่ 1x104 หน่วยโคโลนี/มล. และ สามารถตรวจน้ำคั้นพืชที่เจือจาง 1: 2,000 ได้ซึ่ง แสดงผลการเกิดปฏิกิริยาภายในเวลา 10-15 นาที