การพัฒนา GLIFT Kit เพื่อตรวจเชื้อไวรัส Sugarcane Mosaic Virus subgroup Maize Dwarf Mosaic Virus

บทคัดย่อ

การนําเทคนิค Gold labeled IgG flow test (GLIFT) มาพัฒนาและปรับใช้เป็ นชุดตรวจสอบไวรัสโรคใบด่างข้าวโพด ( Sugarcane mosaic virus; SCMV) ที่สามารถตรวจสอบได้แม่นยํา ใช้ง่าย สะดวก และอ่านผลได้รวดเร็ว โดยอาศัยหลักการทางเซรุ่มวิทยา และ lateral flow technique บนแผ่นไนโตรเซลลูโลส เมมเบรน (Nitrocellulose membrane; NCM) ทดสอบคุณภาพและความเข้มข้นที่เหมาะสมของ IgG ต่อเชื้อ SCMV ด้วยวิธี Dot immunobinding assay (DIBA) เตรียม Gold conjugated IgG โดยนําอนุภาคทอง (colloidal gold) มาเชื่อมต่อกับ IgG ของเชื้อ SCMV ที่มีความเข้มข้น 1 mg/ml และเตรียม conjugatedrelease pad (CRP) โดยใช้ Gold conjugated IgG ปริมาณ 6.6 μl/cm ทําเส้น control line ด้วย Goat anti rabbit IgG ความเข้มข้นอัตรา 1:3 และทําเส้น test line โดยใช้ IgG ของเชื้อ SCMV ปริมาณ 40 μl (2.2 μl/cm) บนแผ่น NCM (S&S – AE 99, ขนาด 10 μm) เมื่อประกอบส่วนต่าง ๆ เป็นชุดตรวจสอบ GLIFT Kit และทําการทดสอบกับนํ้าคั้นใบข้ าวโพดจากต้นข้าวโพดที่เป็นโรค พบว่าชุดตรวจสอบ GLIFT kit ที่พัฒนาปรับใช้ครั้งนี้สามารถตรวจสอบไวรัสใบด่างข้าวโพดได้ ที่ความเข้มข้น 1 : 10 สามารถทราบผลได้รวดเร็ว คือ เส้น control line และ test line ปรากฏสีในเวลาประมาณ 5-10 นาที