การพัฒนาเทคนิค Triplex Real-Time PCR เพื่อตรวจคัดกรองข้าวโพด ดัดแปลงพันธุกรรม ตามมาตรฐาน ISO/IEC17025

บทคัดย่อ

การตรวจวิเคราะห์พืชดัดแปลงพันธุกรรมห้องปฏิบัติการทั่วไปใช้วิธีการตรวจวิเคราะห์เชิงคุณภาพ โดยตรวจคัดกรองยีน CaMV 35S promoter และ NOS terminator ที่ตัดต่อเข้าไปในพืชดัดแปลงพันธุกรรม แบบทดสอบทีละยีน (Single Real-Time PCR) ควบคุมคุณภาพการทดสอบโดยตรวจยีนจำ เพาะอ้างอิงของพืช (กรณีข้าวโพดทดสอบยีน hmg) ด้วย PCR หรือ Real-time PCR ซึ่งเป็นวิธีที่ต้องใช้เวลาในการทดสอบทีละปฏิกิริยา งานวิจัยนี้ได้พัฒนาวิธีการตรวจคัดกรองข้าวโพดดัดแปลงพันธุกรรมโดยการทดสอบยีนเป้าหมายทั้งสามชนิดพร้อมกันในปฏิกิริยาเดียว (Triplex Real-Time PCR) จากการทดสอบความใช้ได้ของวิธีการตรวจวิเคราะห์ในการตรวจยีน CaMV 35S promoter, NOS terminator และยีน hmg ของข้าวโพด ในปฏิกิริยาเดียวกัน พบว่า มีความจำเพาะและความไวในการตรวจวิเคราะห์ ขีดจำกัดขั้นต่ำการปะปนที่สามารถตรวจได้ (Limit of detection) ร้อยละ 0.01 ความเข้มข้นของดีเอ็นเอต้นแบบในการทดสอบ 50-200 นาโนกรัมต่อปฏิกิริยา ผลการตรวจวิเคราะห์ข้าวโพดจำนวน 17 ตัวอย่าง ให้ผลถูกต้องตรงกับการทดสอบด้วยวิธีเดิมของห้องปฏิบัติการ วิธีการทดสอบที่พัฒนาขึ้นใหม่สามารถลดต้นทุนและระยะเวลาในการทดสอบโดยมีประสิทธิภาพการตรวจวิเคราะห์เทียบเท่าและดีกว่าวิธีการเดิมสามารถใช้เป็นวิธีมาตรฐานในการตรวจคัดกรองข้าวโพดและผลิตภัณฑ์ข้าวโพดดัดแปลงพันธุกรรมและได้ผ่านการรับรองวิธีการทดสอบตามมาตรฐานสากล ISO/IEC17025 จากสำนักมาตรฐานห้องปฏิบัติการ ปัจจุบันได้ขยายผลใช้เป็นวิธีการทดสอบมาตรฐานของห้องปฏิบัติการ สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ กรมวิชาการเกษตร