การเพิ่มประสิทธิภาพการใช้เทคนิค Co-PCR ในการตรวจหาเชื้อ Acidovorax citrulli สาเหตุโรคผลเน่าในเมล็ดแตงโม
DOI:
https://doi.org/10.14456/thaidoa-agres.2023.2คำสำคัญ:
การรับรองเมล็ดพันธุ์, แตงโม, พืชตระกูลแตง, ผลเน่าแตงโมบทคัดย่อ
การตรวจหาเชื้อ Acidovorax citrulli (Ac) ด้วยเทคนิค Co-PCR โดยใช้ชุดไพรเมอร์ 521 ที่พัฒนาเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการศึกษานี้ ประกอบด้วยไพรเมอร์4 เส้น ได้แก่ AC-ORF12F และ AC-ORF1F4 ที่ความเข้มข้น 0.4 µM และ ไพรเมอร์ AC-ORF13R และ AC-ORF3F3 ที่ ความเข้มข้น 0.2 µM ที่อุณหภูมิannealing 72o ซ. ทำให้มีความจำเพาะ และความไวในการ ตรวจดีเอ็นเอของเชื้อเป้าหมายได้ต่ำสุด 1pgการ ตรวจหาเชื้อในกองเมล็ดพันธุ์พบว่า มีความไวใน การตรวจเชื้อในกองเมล็ดที่อัตราปนเปื้อน 0.01% มีการปนเปื้อนเชื้อเริ่มต้น 37colony formingunit (CFU) โดยที่อัตราการปนเปื้อนเดียวกันนี้ตรวจหา เชื้อ Ac ไม่พบตามวิธีการมาตรฐานสากลของ ISHI-Veg
References
Dutta, B., H. Scherm, R. D. Gitaitis and R. R. Walcott. 2012. Acidovorax citrulli seed inoculum load affects seedling transmission and spread of bacterial fruit blotch of watermelon under greenhouse conditions. Plant Dis. 96(5): 705-711.
EPPO. 2021. EPPO A1 List of pests recommended for regulation as quarantine pests version 2021-09. Available at: https://www.eppo.int/ACTIVITIES/plant_quarantine/A1_list. Accessed: 14 November 2021.
Giovanardi, D., S. A. Sutton, E. Stefani, and R. R. Walcott. 2018. Factors influencing the detection of Acidovorax citrulli in naturally contaminated cucurbitaceous seeds by PCR-based assays. Seed Sci. Technol. 46(1): 93-106.
ISHI-Veg. 2021. Detection of Acidovorax citrulli in Cucubit Seeds by SE-qPCR. International Seed Federation (ISHI), Nyon, Switzerland.
Kim, Y. T., K. S. Park, H. S. Kim, H. I. Lee and J. S. Cha. 2015. Development of nested-PCR assay to detect Acidovorax citrulli, a causal agent of bacterial fruit blotch at Cucurbitaceae. Res. Plant Dis. 21: 74-81.
Korakngam, C., J. Watcharachaiyakup, S.Patarapuwadol, W. Kositratana. 2018. Detection of Acidovorax citrulli by co-operational polymerase chain reaction for seed health testing of watermelon seed. Thai J. Agric. Sci 36(3): 280-292.
Kositcharoenkul, N., O. Chatchawankanphanich, A. Bhunchoth and W. Kositratana. 2011. Detection of Xanthomonas citri subsp. citri from field samples using single‐tube nested PCR. Plant Pathol. 60(3): 436-442.
Lu, Y., H. J. Zhang, Z. J. Zhao, C. L. Wen, W. U. Ping, S. H. Song, S. C. Yu, L. X. Luo and X. L. Xu. 2020. Application of droplet digital PCR in detection of seed-transmitted pathogen Acidovorax citrulli. J Integr. Agric. 19(2): 561-569.
Olmos, A., E. Bertolini and M. Cambra. 2002. Simultaneous and co-operational amplification (Co-PCR): a new concept for detection of plant viruses. J. Virol. Methods 106: 51–59.
Öztürk, N. and H. Basim. 2022. A real-time PCR assay using locked nucleic acid probe for detection of Acidovorax citrulli. J Plant Dis. Prot. 129(2): 395-409.
Weisburg, W. G., S. M. Barns, D. A. Pelletier and D. J. Lane. 1991. 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study. J. Bacteriol. 173(2): 697-703.
Downloads
เผยแพร่แล้ว
How to Cite
ฉบับ
บท
License
Copyright (c) 2023 วารสารวิชาการเกษตร
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
วารสารวิชาการเกษตร
