การโคลนและวิเคราะห์ยีน OsSKIPa ของข้าวพันธุ์หอมมะลิ 105

บทคัดย่อ

ยีน SKIPa มีบทบาทสำคัญต่อความ สามารถในการมีชีวิตอยู่และเจริญเติบโตของ เซลล์ (Cell viability) ทำให้เซลล์สามารถปรับตัว ต่อสภาวะเครียดได้ดี ช่วยให้พืชดำรงชีวิตอยู่ได้ ในสภาวะที่ไม่เหมาะสม เช่น สภาวะแห้งแล้ง และดินเค็ม เป็นต้น งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์ เพื่อโคลนยีน OsSKIPa จากข้าวพันธุ์หอมมะลิ 105 ซึ่งเป็นข้าวที่มีลักษณะทนแล้งได้ดี และ สร้างชุด cassette ยีน สำหรับนำไปใช้ในการ ปรับปรุงพันธุ์พืชเพื่อให้ทนต่อสภาวะแวดล้อมที่ ไม่เหมาะสม โดยวิธีการถ่ายยีนเข้าสู่พืช ดำเนิน การวิจัยที่สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ กรมวิชาการเกษตร จ. ปทุมธานี ระหว่างเดือน พฤษภาคม - เดือนกันยายน ปี พ.ศ. 2554 ทำการโคลนยีน OsSKIPa จากข้าว โดยออก แบบไพรเมอร์ บริเวณที่มีความจำเพาะกับยีน OsSKIPa นำมาทำปฏิกิริยา PCR กับจีโนมิก ดีเอ็นเอของข้าว ได้ยีนขนาด 2,353 คู่เบส มีส่วน ของ Open Reading Frame (ORF) ความยาว เท่ากับ 1,824 คู่เบส, 5’UTR มีขนาด 130 คู่ เบส, 3’UTR มีขนาด 399 คู่เบส และพบลำดับ นิวคลีโอไทด์ตำแหน่งของ polyadenylation signal (ATAAA motif) สามารถถอดรหัสเป็น กรดอะมิโนได้ 607 amino acid อยู่ในตำแหน่ง โดเมนของ Putative Function: SKIP/SNW domain containing protein และมีน้ำหนัก โมเลกุลเท่ากับ 81.2 กิโลดาลตัน นำข้อมูลที่ได้มา วิเคราะห์โครงสร้างของยีน พบว่า ยีน OsSKIPa ที่สังเคราะห์ได้จากข้าวมีส่วนประกอบครบทั้งยีน เมื่อนำลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ได้ไปเปรียบเทียบกับ ยีนชนิดเดียวกันในฐานข้อมูล GenBank พบว่า ยีนที่ได้มีความเหมือนอย่างสูง (% Max Identities) กับข้าว (Oryza sativa L.) ในกลุ่ม Japonica Group (NM001054719.1) ส่วนของ SNW/SKI-interacting protein-like ที่พบใน ข้าวป่า (Oryza brachyantha) (XM006649000.1) และส่วนของ SNW/SKI-interacting protein, transcript variantX1, transcript variantX2 และ transcript variantX3 ที่พบในพืชวงศ์หญ้า Brachypodium distachyon L. (XM010237787.2, XM010237788.2, XM010237789.2) มีค่า เท่ากับ 99% 94% และ 86% ตามลำดับ ทำการสร้างชุด cassette ยีน OsSKIPa โดยการ เชื่อมต่อยีน OsSKIPa เข้ากับ plant expression vector (pCAMBIA2300) ที่ประกอบด้วย โปรโมเตอร์ (35SCaMV) และเทอร์มิเนเตอร์ (NOS) ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมการแสดงออก ของยีน มียีน nptII เป็นยีนเครื่องหมายในการคัด เลือกได้พลาสมิดสายผสม (pCAMBIA2300 – OsSKIPa) ขนาด 11.5 กิโลเบส