การพัฒนาวิธีการตรวจสอบเชื้อ Grapevine yellow speckle viroid 1 และ 2 (GYSVd- 1 และ 2) สาเหตุโรค Grapevine Yellow Speckle ด้วยวิธี RT-PCR

บทคัดย่อ

เชื้อ Grapevine yellow speckle viroid 1 (GYSVd-1) และ Grapevine yellow speckle viroid 2 (GYSVd-2) เป็นเชื้อสาเหตุโรคพืชที่สำคัญในองุ่นซึ่งก่อให้เกิดโรค “grapevine yellow speckle disease” พบได้ทั่วไปในพื้นที่ปลูกองุ่น เชื้อไวรอยด์ดังกล่าวสามารถถ่ายทอดไปกับท่อนพันธุ์หรืออุปกรณ์ที่ใช้ทางการเกษตรที่ปนเปื้อนเชื้อได้ง่าย ทำให้โรคดังกล่าวสามารถแพร่กระจายได้ง่ายและรวดเร็ว ดังนั้นการศึกษาพัฒนาวิธีการในการตรวจวินิจฉัยที่มีประสิทธิภาพและมีความถูกต้องแม่นยำสูง จึงมีความจำเป็นต่อการป้องกันความเสียหายที่เกิดจากการแพร่ระบาดของโรคดังกล่าว จากการสำรวจโรคไวรัสและไวรอยด์ในพื้นที่ปลูกองุ่นในพื้นที่ จ.สระบุรี และ จ.นครราชสีมา เดือนกุมภาพันธ์และ มีนาคม ปี พ.ศ. 2557 ตรวจพบองุ่นแสดงอาการผิดปกติ ใบมีจุดเหลือง กระจายทั่วใบ จากการพัฒนาเทคนิคตรวจสอบด้วยเทคนิคอณูชีวโมเลกุลโดยการสกัดอาร์เอ็นเอด้วยวิธี CTABและปฏิกิริยา RT-PCR โดยใช้คู่ไพรเมอร์ GYSVd1 (c-GYSVd1: CGAGGCTCACTCCCCCTCTGCC / h-GYSVd1: TCGTCGACGAAGGGGTGCACTCC) และ GYSVd2 (upper)(c-GYSVd2 (upper): GGTCCGCGGAGGCCTTCCGAGG / h-GYSVd2 (upper): TGCAGAGAAAAGAAGAAGGGCCCAG) ผลของ PCR นำมาโคลน ศึกษาลำดับเบสและวิเคราะห์ผล สามารถตรวจพบเชื้อ GYSVd-1 และ GYSVd-2 จำนวน 6 และ 11 ตัวอย่างตามลำดับ จากตัวอย่างใบองุ่นทั้งสิ้น 20 ตัวอย่างโดยเชื้อ GYSVd-1 และเชื้อ GYSVd-2 มีขนาดตั้งแต่ 353-389 และ 362-365 นิวคลีโอไทด์ ตามลำดับ และมีความเหมือนกับเชื้อ GYSVd-1 และ GYSVd-2 ในฐานข้อมูลของ GenBank ที่ 93-99% และ 98-99% ตามลำดับซึ่งเป็นการตรวจพบเชื้อ GYSVd-2 ครั้งแรกในสภาพแปลงปลูกองุ่นในประเทศไทย