วิธีวินิจฉัยเพื่อตรวจสอบเชื้อพอสพิไวรอยด์ในพืชวงศ์ Solanaceae และเมล็ดพันธุ์

บทคัดย่อ

ปัจจุบันหลายประเทศใช้กฎระเบียบด้านสุขอนามัยพืชสำหรับเชื้อพอสพิไวรอยด์โดยเฉพาะ Potato spindle tuber viroid (PSTVd) สาเหตุโรคที่สำคัญทางเศรษฐกิจในพืชวงศ์ Solanaceae และเมล็ดพันธุ์ จำเป็นต้องหาวิธี ตรวจสอบที่เชื่อถือได้ และเหมาะสมต่อค่าใช้จ่าย ได้นำเมล็ดมะเขือเทศที่ติดเชื้อไวรอยด์ PSTVd มาจากมลรัฐนอร์ทแคโรไลนา มาใช้ศึกษาวิธี วินิจฉัยเพื่อตรวจสอบเชื้อ PSTVd ในเมล็ดพืชวงศ์ Solanaceae ณ ห้องปฏิบัติการพืชผักของมลรัฐเซาท์แคโรไลนา สหรัฐอเมริกา จากการสกัดอาร์เอ็นเอด้วยวิธี Trizol reagent และSDS-potassium acetate พบว่าหนึ่งเมล็ด มะเขือเทศที่ติดเชื้อ PSTVd สามารถตรวจสอบด้วยสองวิธีวินิจฉัย Reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR) และReal time RT-PCR โดยเฉพาะวิธีวินิจฉัย Realtime RT-PCR มีความไวและแม่นยำสูง สามารถตรวจสอบเชื้อ PSTVd จากเมล็ดติดเชื้อหนึ่งเมล็ดที่ผสมอยู่ในเมล็ดปกติที่ระดับต่างๆของพืชวงศ์ Solanaceae ได้ทั้งสองวิธีการสกัดนอกจากนี้การทดสอบประสิทธิภาพของวิธีวินิจฉัย Real time RT-PCR ในเบื้องต้นสามารถค้นพบเชื้อ PSTVd ติดมากับเมล็ดพันธุ์มะเขือเทศที่ใช้เพื่อปรับปรุงพันธุ์ในโรงเรือนมลรัฐนอร์ทแคโรไลนา ผลการปลูกเชื้อด้วยน้ำคั้นจากเมล็ดมะเขือเทศที่ติดเชื้อ PSTVd บนพืชวงศ์Solanaceae ที่ระยะเวลา 8 สัปดาห์ พบว่าต้นพืชติดเชื้อโดยแสดงอาการรุนแรงในมะเขือเทศ