การส่งถ่ายยีน Antisense ACC Oxidase สู่โปรโตคอร์มกล้วยไม้เอื้องดอกมะขาม (Dendrobium delacourii Guill) โดยใช้ Agrobacterium tumefaciens เป็นตัวกลาง

บทคัดย่อ

การวิจัยครั้งนี้เพื่อศึกษาการส่งถ่ายยืน antisense ACC oxidase สู่โปรโตคอร์ม กล้วยไม้เอื้องดอกมะขามโดยใช้ Agrobacterium tumefaciens เป็นตัวกลางในการส่งถ่ายยีน การศึกษาอิทธิพลของสารปฏิชีวนะซีโฟแทกซีมต่อการเจริญของเชื้อ A. tumefaciens สายพันธุ์ LBA 4404 (pCAMBIA 1305.1 ที่มียีน antisense ACC oxidase  และมียีน hptll เป็นยีนเครื่องหมาย) ในอาหารเหลว LB เป็นเวลา 24 ชม. พบว่ามีการเจริญของเชื้อ Agrobacterium ที่ได้จากการเลี้ยงในอาหารที่ไม่มีซีโฟแทกซีมและที่มีซีโฟแทกซีม 25 มก./ล. เท่านั้น ที่ความเข้มข้น 50 70 100 125 150 และ 175 มก./ล. ไม่มีการเจริญของเชื้อเกิดขึ้น การเพาะเลี้ยงโปรดตคอร์มเอื้องดอกมะขามบนอาหารสังเคราะห์สูตร VW ดัดแปลง ที่เติมสารปฏิชีวนะซีโฟแทกซีมความเข้มข้น 100-500 มก./ล. พบว่าโปรโตคอร์มเอื้องดอกมะขามสามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารสังเคราะห์ที่เติมซีโฟแทกซีมทุกระดับความเข้มข้นและสามารถเจริญเติบโตได้ในซีโฟแทกซีมความเข้มข้มสูงสุดที่ 500 มก./ล. และเมื่อเพาะเลี้ยงโปรโตคอร์มกล้วยไม้ในอาหารที่เติมสารปฏิชีวนะไฮโกรมัยซินในความเข้มข้นระดับต่าง ๆ กัน พบว่าอัตราการรอดชีวิตของโปรโตคอร์มเอื้องดอกมะขาม ที่เพาะเลี้ยงในอาหารที่เติมสารปฏิชีวนะไฮโกรมัยซินที่ระดับความเข้มข้น 10 15 20 25 และ 30 มก./ล. โปรโตคอร์มไม่สามารถเจริญเติบโตได้ โปรโตคอร์มเปลี่ยนจากสีเขียวเป็นสีเหลืองซีด จากนั้นจะกลายเป็นสีน้ำตาลและตายไปในที่สุด และจากการบ่มโปรโตคอร์มกล้วยไม้เอื้องดอกมะขามร่วมกับ A. tumefaciens สายพันธุ์ LBA 4404 (pCAMBIA 1305.1) ที่อุณหภูมิห้อง พบว่าระยะเวลาที่เหมาะสมในการบ่มโปรโตคอร์มเอื้องดอกมะขามกับเชื้อ Agrobacterium คือ 20 นาที เนื้อเยื่อพืชมีการแสดงออกเป็นยีน Gus  จากการตรวจสอบด้วยวิธี Gus assay