การตรวจหาเชื้อ Brucella melitensis โดยวิธี Real-time PCR และวิธีการเพาะแยกเชื้อจากตัวอย่างอวัยวะของแพะเนื้อในประเทศไทย
Article Sidebar
Main Article Content
บทคัดย่อ
Brucella melitensis เป็นสาเหตุหลักของโรคบรูเซลโลสิสในแพะ ทำให้แพะเกิดการแท้งลูก นอกจากนี้โรคบรูเซลโลสิสยังเป็นโรคติดต่อระหว่างสัตว์และคนที่สำคัญ วิธีมาตรฐานสำหรับการชันสูตรโรค บรูเซลโลสิสคือวิธีการเพาะแยกเชื้อ แต่เชื้อบรูเซลลาเป็นเชื้อที่ก่ออันตรายต่อผู้ปฏิบัติงาน และต้องใช้เวลานานในการวิเคราะห์ ดังนั้นงานวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์ เพื่อประเมินความสามารถวิธีการตรวจหาเชื้อ B. melitensis โดยวิธี Real-time PCR เปรียบเทียบกับวิธีการเพาะแยกเชื้อ โดยเก็บตัวอย่างอวัยวะจากแพะเนื้อที่ให้ผลบวกและผลสงสัยทางซีรั่มวิทยา liver, spleen, mammary/inguinal lymph node, mandibular lymph node, popliteal lymph node, parotid lymph node, pre-femoral lymph node และ pre-scapular lymph node ทั้งหมด 320 ตัวอย่าง โดย primers และ probe ที่ใช้มีความจำเพาะต่อยีน IS711 ของโรคบรูเซลโลสิส ผลการศึกษาพบว่า ความเข้มข้นของดีเอ็นเอต่ำสุดที่วิธี Real-time PCR สามารถวิเคราะห์ได้ คือ 2 เฟมโตกรัม ไม่มีปฏิกิริยาข้ามกับแบคทีเรียชนิดอื่น และวิธี Real-time PCR มีค่าความไว 92.45% ความจำเพาะ 92.88% และค่าความถูกต้อง 92.81% ดังนั้นวิธี Real-time PCR สามารถนำมาใช้ในการตรวจวินิจฉัยโรคบรูเซลโลสิสที่มีความจำเพาะ ความไว รวดเร็ว และปลอดภัย
Article Details
เอกสารอ้างอิง
Alton, G.G., Jones, L.M. and Pietz, D.E. 1975. Laboratory techniques in brucellosis, second ed. Monograph Series No. 55 World Health Organisation, Geneva.
Blasco, J.M. 1992. Diagnosis of Brucella melitensis infection in small ruminants. In: Plommet, M. (Ed.), Prevention of Brucellosis in the Mediterranean Countries. Puduc Scientific Publishers, Wageningen, The Netherlands. 272-278.
Blood, D.C. and Henderson, J.A. 1968. Veterinary medicine. Bailliere Tindal Cassel Ltd. London, England.
Bogdanovich, T., Skurnik, M., Lubeck, P.S., Ahrens, P. and Hoorfar, J. 2004. Validated 5’ Nuclease PCR Assay for Rapid Identifidation of the Genus Brucella. J. Clin. Microbiol. 42: 2261-2263.
Bounaadja, L., Albert, D., Chenais, B., Henault, S., Zygmunt, M.S., Poliak, S. and Garin-Bastuji, B. 2009. Real-time PCR for identification of Brucella spp.: A comparative study of IS711, bcsp31 and per target genes. Vet. Microbiol. 137:156-164.
Bricker, B.J. 2002. PCR as a diagnostic tool for brucellosis. Vet. Microbiol. 90: 435-446.
Godfroid, J., Cloeckaert, A., Liautard, J.P., Kohler, S., Fretin, D., Walravens, K., Garin-Bastuji, B. and Letesson, J.J. 2005. From the discovery of the Malta fever’s agent to the discovery of a marine mammal reservoir, brucellosis has continuously been a re-emerging zoonosis. Vet. Res. 36: 313-326.
Hinic, V., Brodard, I., Thomann, A., Holub, M., Miserez, R. and Abril, C. 2009. IS711-based real-time PCR assay as a tool for detection of Brucella spp. in wild boars and comparison with bacterial isolation and serology. BMC Vet. Res. 5:22.
Kanitpun, R., Ekgatat, M., Thammasart, S. and Nokdhes, C. 2006. Identification of Brucella spp. by polymerase chain reaction. J. Regional Bureau Anim. Health Sanitary. 6. 3: 1-9.
Kwok, S. and Higuchi, R. 1989. Avoiding false positive with PCR. Nature. 339: 273-8.
Lapaque, N., Moriyon, I., Moreno, E. and Gorvel, J.P. 2005. Brucella lipopolysaccharide acts as a virulence factor. Microbiology. 8: 60-66.
Nielsen, K. 2002. Diagnosis of brucellosis by serology. Vet. Microbiol. 90: 447-459.
Office International Des Epizooties. 2012. (cited 18 July 2013). Terrestrial Manual. Biosafety and biosecurity in the veterinary microbiology laboratory and animal facilities. Available from: http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/1.01.03_BIOSAFETY.pdf.
Pappas, G., Panagopoulou, P., Akritidis, N., Christou, L. and Tsianos, E.V. 2006. The new global map of human brucellosis. Lancet Infect. Dis. 6: 91-99.
Pellicer, T., Ariza, J., Foz, A., Pallares, R. and Gudiol, F. 1988. Specific antibodies detected during relapse of human brucellosis. J. Infect. Dis. 157: 918-924.
Probert, W.S., Schrader, K.N., Khuong, N.Y., Bystrom, S.L. and Graves, M.H. 2004. Real-Time Multiplex PCR Assay for Detection of Brucella spp., B. abortus, and B. melitensis. J. Clin. Microbiol. 42: 1290-1293.
Redkar, R., Rose, S., Bricker, B. and DelVecchio, V. 2001. Real-time detection of Brucella abortus, Brucella melitensis and Brucella suis. Mol. Cell. Probe. 15: 43-52.
Seleem, M.N., Boyle, S.M. and Sriranganathan, N. 2010. Brucellosis: A re-emerging zoonosis. Vet. Microbiol. 140: 392-398.
Sohrabi, M., Mobarez, A.M., Khoramabadi, N., Doust, R.H. and Behmanesh, M. 2014. Efficient diagnosis and treatment follow-up of human brucellosis by a novel quantitative TaqMan real-time PCR assay: A human clinical survey. J. Clin. Microbiol. 52: 4239-4243.
