ประสิทธิภาพของสารละลายน้ำเชื้อชนิด Tris Egg Yolk แบบแห้งที่ถูกเก็บไว้เป็นเวลานาน ในอุณภูมิที่เย็น (4 องศาเซลเซียส) ต่อน้ำเชื้อโคแช่แข็ง
Main Article Content
บทคัดย่อ
สารละลายน้ำเชื้อแบบแห้งได้ผ่านการพิสูจน์แล้วว่า มีประสิทธิภาพในการเป็นสารป้องกันการแช่แข็งสำหรับอสุจิของโคที่อยู่ในน้ำเชื้อแช่แข็ง แต่ความเสถียรของสารละลายน้ำเชื้อชนิด Tris Egg Yolk แบบแห้งหลังถูกเก็บไว้เป็นเวลานาน (3 เดือน) ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส นั้นยังเป็นที่สงสัยอยู่ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินประสิทธิภาพสารละลายน้ำเชื้อชนิด Tris Egg Yolk แบบแห้งหลังจากถูกเก็บไว้เป็นเวลานาน (3 เดือน) ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส โดยนำมาผสมกับน้ำเชื้อโคแล้ววิเคราะห์คุณภาพน้ำเชื้อดังกล่าวหลังจาก การเจือจาง การบ่มปรับสมดุล และการแช่แข็ง จากนั้นทำการเปรียบเทียบกับค่าต่างๆ เหล่านั้นกับน้ำเชื้อที่ละลายอยู่ในสารละลายน้ำเชื้อสด พ่อโคนมโฮสไตน์จำนวน 8 ตัว ถูกรีดเก็บน้ำเชื้อ โดยน้ำเชื้อของแต่ละตัวจะถูกแบ่งออกเป็น 2 กลุ่ม คือกลุ่มควบคุม (n=8) และกลุ่มทดลอง (n=8) ซึ่งน้ำเชื้อในกลุ่มควบคุมจะถูกผสมด้วยสารละลายเจือจางน้ำเชื้อแบบสด และน้ำเชื้อในกลุ่มทดลองจะถูกผสมด้วยสารละลายเจือจางน้ำเชื้อสดแบบแห้ง จากนั้นทำการแช่เย็นและแช่แข็งน้ำเชื้อทั้งหมด โดยให้มีความเข้มข้นสุดท้ายของอสุจิทั้งสองกลุ่มมีค่าประมาณ 80x106 ตัว/มิลลิลิตร แล้วทำการเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ -196 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ระหว่างกระบวนการแช่เย็นและแช่แข็งจะมีการทำการวิเคราะห์ค่าร้อยละของ อสุจิที่มีการเคลื่อนที่ อสุจิที่มีการเคลื่อนที่ไปข้างหน้า อสุจิที่มีการเคลื่อนที่ไปข้างหน้าอย่างรวดเร็ว ด้วยโปรแกรม Computer Assisted Semen Analysis (CASA) และร้อยละของอสุจิที่มีความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มด้วยวิธี Hypoosmotic Swelling Test (HOST) ใน 3 จุดหลัก คือ หลังจาก การเจือจาง การบ่มปรับสมดุล และการแช่แข็ง ของน้ำเชื้อจากทั้งสองกลุ่ม ขั้นตอนการทดลองทั้งหมดจะถูกทำซ้ำอีก 3 ครั้ง โดยทำการตรวจวิเคราะห์คุณภาพน้ำเชื้อที่อยู่ในสารละลายน้ำเชื้อแบบแห้งที่ถูกเก็บไว้นาน 1, 2 และ 3 เดือนที่ 4 องศาเซลเซียส ในขวดสุญญากาศของกลุ่มทดลอง เปรียบเทียบกับน้ำเชื้อที่อยู่ในสารละลายน้ำเชื้อสดของกลุ่มควบคุม ผลการทดลองพบว่า ร้อยละของ อสุจิที่มีการเคลื่อนที่ อสุจิที่มีการเคลื่อนที่ไปข้างหน้า อสุจิที่มีการเคลื่อนที่ไปข้างหน้าอย่างรวดเร็ว และอสุจิที่มีความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มหลังจาก การเจือจาง การบ่มปรับสมดุล และการแช่แข็ง ของน้ำเชื้อจากกลุ่มควบคุมไม่แตกต่างจากค่าเหล่านั้นของน้ำเชื้อในสารละลายน้ำเชื้อสดแบบแห้ง และในสารละลายน้ำเชื้อแบบแห้งที่เก็บไว้นาน 1, 2 และ 3 เดือน ของกลุ่มทดลอง (P>0.05) ซึ่งค่าต่าง ๆ เหล่านี้เป็นที่ยอมรับสำหรับบ่งชี้ว่า สารละลายน้ำเชื้อแบบแห้งที่ถูกทดลองทั้งหมดนั้นสามารถเป็นสารป้องกันการแช่แข็งของอสุจิในน้ำเชื้อแช่แข็งได้ สรุปสารละลายน้ำเชื้อชนิด Tris Egg Yolk แบบแห้งที่ถูกเก็บรักษาไว้เป็นเวลานาน (3 เดือน) ยังคงมีประสิทธิภาพดีในการรักษาคุณภาพน้ำเชื้อโคแช่แข็ง
Article Details
เอกสารอ้างอิง
Alcay, S. , M. B. Toker, E. Gokce, B. Ustuner, N. T. Onder, H. Sagirkaya, Z. Nur and M. K. Soylu. 2015. Successful ram semen cryopreservation with lyophilized egg yolk-based extender. Cryobiology. 71: 329-333.
Barszcz, K., D. Wiesetek, M. Wasowicz and M. Kupczynska. 2012. Bull semen collection and analysis for artificial insemination. J. Agri. Sci. 4: 1-10.
Chaudhary, P. J., A. J. N. Dhami, D. V. Chaudhari and S. C. Parmar. 2017. Freezability of cattle and buffalo semen and association of fresh and frozen-thawed sperm quality parameters. Int. J. Curr. Microbiol. App. Sci. 6: 1445-1454.
Correa, J. R. and P. M. Zavos. 1994. The hypoosmotic swelling test: Its employment as an assay to evaluate the functional integrity of the frozen-thawed bovine sperm membrane. Theriogenology. 42: 351-360.
Edmonson, A. J., I. J. Lean, L. D. Weaver, T. Farver and G. Webster. 1989. A body condition scoring chart of Holstein dairy cows. J. Dairy Sci. 72: 68-78.
Forouzanfar, M., M. Sharafi, S. M. Hosseini, S. Ostadhosseini, M. Hajian, L. Hosseini, P. Abedi, N. Nili, H. R. Rahmani and M. H. Nasr-Esfahani. 2010. In vitro comparison of egg yolk-based and soybean lecithin-based extenders for cryopreservation of ram semen. Theriogenology. 73: 480-487.
Gaidhani, K. A., M. Harwalkar, D. Bhambere and P. S. Nirgude. 2015. Lyophilization/freezing drying: A review. World J. Phar. Res. 4: 516-543.
Hu, J. H., Q. W. Li, L. S. Zan, Z. L. Jiang, J. H. An, L .Q. Wang and Y. H. Jia. 2010. The cryoprotective effect of low density lipoproteins in extenders on bull spermatozoa following freezing-thawing. Anim. Reprod. Sci. 117: 11-17.
Jeyendran, R. S., H. H. Vander-Ven, M. Perez-Pelaez, B. G. Crabo and L. J. D. Zanevld. 1984. Development of an assay to assess the functional integrity of the human sperm membrane and its relationship to other semen characters. J. Repord. Fertil. 70: 219-228.
Kajaysri, J., U. Rungroekrit, S. Ruenphet and C. Chapanya. 2017. Efficiency of lyophilized Tris egg yolk extender on bull semen cryopreservation. Proc. SAADC Anim. Sci. Cong. 323-325.
Kumar, S., J. D. Millar and P. F. Watson. 2003. The effect of cooling rate on survival of cryopreserved bull, ram and boar spermatozoa: A comparison of two controlled-rate cooling machines. Cryobiology. 46: 246-253.
Moustacas, V. S., F. G. Zaffalon, M. A. Lagares, A. M. Loaiza-Eccheverri, F. C. Varago, M. M. Neves, L. G. Heneine, R. P. Arruda and M. Henry. 2011. Natural, but not lyophilized, low density lypoproteins were an acceptable alternative to egg yolk for cryopreservation of ram semen. Theriogenology. 75: 300-307.
Rasul, Z., M. Anzar, S. Jalali and N. Ahmad. 2000. Effect of buffering system on post-thaw motion characteristics, plasma membrane integrity and acrosome morphology of buffalo spermatozoa. Anim. Reprod. Sci. 59: 31-41.
Sundararaman, M. N., J. Kalatharan and K. Thilak Pon Jawahar. 2012. Computer assisted semen analysis for quantification of motion characteristics of bull sperm during cryopreservation cycle. Vet. World. 5: 723-726.
Wall, R. J. and R. H. Foote. 1999. Fertility of bull sperm frozen and stored in clarified egg yolk-Tris-glycerol extender. J. Dairy Sci. 82: 817-821.