การผลิตตัวอ่อนแบบนอกร่างกายและการเก็บรักษาโดยการแช่แข็งเพื่อเป็นเทคโนโลยีช่วยในการผลิตโคเนื้อคุณภาพ
Main Article Content
บทคัดย่อ
งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาเทคนิคการผลิตตัวอ่อนนอกร่างกายและการแช่แข็งตัวอ่อนในระดับห้องปฏิบัติการเพื่อเป็นเทคโนโลยีช่วยในการผลิตโคเนื้อคุณภาพ โดยใช้ตัวอ่อนระยะตั้งแต่ 4 เซลล์ขึ้นไปจำนวน 124 ตัวอ่อน จากโอโอไซต์ทั้งหมด 342 โอโอไซต์ แบ่งตัวอ่อนออกเป็น 3 กลุ่มการทดลอง ดังต่อไปนี้คือ กลุ่มการทดลองที่ 1 คือกลุ่มไม่ผ่านการแช่แข็ง (กลุ่มควบคุม) กลุ่มการทดลองที่ 2 คือกลุ่มแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชันด้วยวิธีไมโครดรอปเลท และกลุ่มการทดลองที่ 3 คือกลุ่มแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชันด้วยวิธีผิวสัมผัสของแผ่นโลหะ ผลการศึกษาพบว่า สัดส่วนของโอโอไซต์ที่ได้รับการปฏิสนธิคิดเป็นร้อยละ 52.9 (181/342) ส่วนตัวอ่อนที่สามารถพัฒนาไปเป็นตัวอ่อนระยะตั้งแต่ 4 เซลล์ขึ้นไปคิดเป็นร้อยละ 36.3 (124/342) กลุ่มที่ผ่านการแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชันด้วยวิธีไมโครดรอปเลท และกลุ่มที่ผ่านการแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชันด้วยวิธีผิวสัมผัสของแผ่นโลหะ ไม่สามารถพัฒนาไปเป็นตัวอ่อนระยะมอรูลา และระยะบลาสโตซิสต์ได้ ซึ่งในกลุ่มที่ไม่ผ่านการแช่แข็งสามารถพัฒนาเป็นตัวอ่อนระยะบลาสโตซิสต์ (ร้อยละ 4.9; 2/40) แต่ไม่มีความแตกต่างกันทางสถิติระหว่างกลุ่มการทดลอง (P>0.05) ในขณะที่สัดส่วนของตัวอ่อนระยะมอรูลา (ร้อยละ 26.8; 11/40) สูงกว่ากลุ่มที่ผ่านการแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (P≤0.05) ผลการประเมินคุณภาพของตัวอ่อนพบว่าตัวอ่อนในกลุ่มที่ผ่านการแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชันด้วยวิธีไมโครดรอปเลทมีคุณภาพจัดอยู่ในระดับคะแนน 3 (ร้อยละ 10.0) และตัวอ่อนที่มีคุณภาพจัดอยู่ในระดับคะแนน 4 (ร้อยละ 50.0) เช่นเดียวกันกับในกลุ่มที่ผ่านการแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชันด้วยวิธีผิวสัมผัสของแผ่นโลหะพบตัวอ่อนที่มีคุณภาพจัดอยู่ในระดับคะแนน 3 (ร้อยละ 2.3) และตัวอ่อนที่มีคุณภาพจัดอยู่ในระดับคะแนน 4 (ร้อยละ 39.5) ซึ่งไม่มีความแตกต่างกันทางสถิติ (P>0.05) ผลการวิจัยนี้สรุปได้ว่าการผลิตตัวอ่อนนอกร่างกายในระดับห้องปฏิบัติการสามารถผลิตตัวอ่อนระยะ 4-16 เซลล์และระยะบลาสโตซิสต์ได้ อย่างไรก็ตามตัวอ่อนที่ผ่านการการแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชันไม่สามารถพัฒนาไปสู่ระยะอื่นๆได้
Article Details

อนุญาตภายใต้เงื่อนไข Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
เอกสารอ้างอิง
Akkoc, T., Taskin, A.C., Caputcu, A.T., Arat, S. and Bagis, H. 2011. The effect of solid surface vitrification (SSV) versus classic vitrification technique on survive rate of in vitro produced bovine blastocysts. J. Anim. Vet. Adv. 10(22): 2885-2891.
Aono A, Nagatomo H, Takuma T, Nonaka R, Ono Y, Wada Y, Abe, Y., Takahashi, M., Watanabe, T. and Kawahara, M. 2013. Dynamics of intracellular phospholipid membrane organization during oocyte maturation and successful vitrification of immature oocytes retrieved by ovum pick-up in cattle. Theriogenology. 79: 1146-1152.
Asami, M., Lam, B.Y.H., Ma, M.K., Rainbow, K., Braun, S., VerMilyea, M.D., Yeo, G.S.H. and Perry, A.C.F. 2022. Human embryonic genome activation initiates at the one-cell stage. Cell Stem Cell. 29: 209–216.
Asgari, V., Hosseini, S.M., Forouzanfar, M., Hajian, M. and Nasr-Esfahani, M.H. 2012. Vitrification of in vitro produced bovine embryos: Effect of embryonic block and developmental kinetics. Cryobiology. 65: 278–283.
Begin, I., Bhatia., B., Blaldassarre, H., Dinnyes, A. and Keefer, C.L. 2003. Cryopreservation of goat oocytes and in vivo derived 2 to 4 cell embryos using the cryoloop (CLV) and solid surface vitrification (SSV) methods. Theriogenology. 59: 1839-1850.
Bo, G.A. and Mapletoft, R.J. 2013. Evaluation and classification of bovine embryos. Anim. Reprod. 10(3): 344-348.
Caamao., J.N., Gomez, E., Trigal, B., Munoz, M., Carrocera, S., Martin, D. and Diez, C. 2015. Survival of vitrified in vitro–produced bovine embryos after a one-step warming in-straw cryoprotectant dilution procedure. Theriogenology. 83: 881–890.
Canon Beltran, K., Cajas, Y.N., Peréz Cerezales, S., Leal, C.L.V., Agirregoitia, Ek., Gutierrez Adán, A., González, E.M. and Rizos, D. 2021. Nobiletin enhances the development and quality of bovine embryos in vitro during two key periods of embryonic genome activation. Sci. Rep. 11: 11796.
Chumnandee, C., Wangsomnuk, P. and Sirisathien, S. 2017. Effects of polyvinyl alcohol on vitrification of mature and immature bovine oocytes. Asia Pac J Sci Technol. 22(4): 1-9.
Department of Livestock Development (DLD). 2012. Beef Cattle Strategy 2012-2016. Ministry of Agriculture and Cooperatives. Bangkok. (In Thai)
Ezoe, K., Yabuuchi, A., Tani, T., Mori, C., Miki, T., Takayama, Y., Beyhan, Z., Kato, Y., Okuno, T., Kobayashi, T. and Kato, K. 2015. Developmental competence of vitrified-warmed bovine oocytes at the germinal-vesicle stage is improved by cyclic adenosine monophosphate modulators during in vitro maturation. Plos One. 10: 1-14.
Faheem, M.S., Baron, E., Carvalhais, I., Chaveiro, A., Pavani, K. and da Silva, F.M. 2014. The effect of vitrification of immature bovine oocytes to the subsequent in vitro development and gene expression. Zygote. 26: 1-10.
Faizah, Z., Darsini, N. and Hinting, A. 2016. Fertilization of bovine oocytes vitrified pre and post in vitro maturation. FMI. 52(2): 104-107.
Food and Agriculture Organization (FAO), 1991. Training manual for embryo transfer in cattle. www.fao.org/docrep/004/t0117e/t0117e00.htm (Accessed 15 September, 2015).
Frei, R.E., Schultz, G.A. and Church, R.B. 1989. Qualitative and quantitative changes in protein synthesis occur at the 8-16 cell stage of embryogenesis in the cow. J. Reprod. Fert. 86: 637-641.
Gupta, M.K., Uhm, S.J. and Lee, H.T. 2007. Cryopreservation of immature and in vitro matured porcine oocytes by solid surface vitrification. Theriogenology. 67: 238-248.
Ishii, T., Tomita, K., Sakakibara, H. and Ohkura, S. 2018. Embryogenesis of vitrified mature bovine oocytes is improved in the presence of multi-layered cumulus cells. J. Reprod. Dev. 64: 95–99.
Malenko, G.P., Kornienko, E.V., Nesterov, I.I. and Kosovsky, G.Y. 2017. A new simple and reliable vitrification device based on Hollow Fiber Vitrification (HFV) method evaluated using IVP bovine embryos. Anim. Reprod. 14(2): 392-399.
Montagner, M.M., Gonçalves, P.B.D., Mills, G.A., Christenson, R.K. and White, B.R. 2006. Freezing swine embryos: do success rates differ between breeds? Nebraska Swine Rep. 21-25.
Office of Agricultural Economics. 2016. Situation of important agricultural products and trends in 2017. Agricultural Information Center Office of Agricultural Economics. Ministry of Agriculture and Cooperatives. Bangkok. 241 p. (In Thai)
Papis, K., Shimizu, M. and Izaike, Y. 2000. Factors affecting the survivability of bovine oocytes vitrified in droplets. Theriogenology. 54: 651-658
Rall, W.F. and Fahy, M. 1985. Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 ◦C by vitrification. Nature. 313: 573–575.
Vajta, G. and Kuwayama, M. 2006. Improving cryopreservation systems. Theriogenology. 65: 236–244.
Van den Abbeel, E. and Van Steirteghem, A. 2000. Zona pellucida damage to human embryos after cryopreservation and consequences for their blastomere survival and in vitro viability. Hum. Reprod. 15(2): 373-378.
Woods, E.J., Benson, J.D., Agca, Y. and Critser, J.K. 2004. Fundamental cryobiology of reproductive cells and tissues. Cryobiology. 48: 146-156.