การตรวจสอบความถูกต้องของปฏิกิริยาการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอด้วยเครื่องหมาย STR บนโครโมโซมเอกซ์และวาย

Abstract

บทคัดย่อ

การศึกษานี้เป็นการประเมินวิธีการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอบนโครโมโซมเอกซ์และวาย จากตัวอย่างเยื่อบุกระพุ้งแก้มที่เก็บบนแผ่น FTA เพื่อหาสภาวะที่เหมาะสมจากการปรับกระบวนการตรวจวิเคราะห์ตัวอย่าง ได้แก่ การลดปริมาตรน้ำยาสำเร็จรูป การลดจำนวนรอบในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอ การลดขั้นตอนการล้างแผ่น FTA และการใช้เซลล์เยื่อบุกระพุ้งแก้มจากแผ่น FTA โดยตรง จากผลการทดสอบของการเพิ่มปริมาณ  ดีเอ็นเอบนโครโมโซมเอกซ์ (X-STR, X-short tandem repeat) และโครโมโซมวาย (Y-STR, Y-short tandem repeat) สามารถลดปริมาตรน้ำยาสำเร็จรูปเหลือร้อยละ 25 และ 20 ตามลำดับ และสามารถลดจำนวนรอบในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอด้วยชุดน้ำยาดังกล่าวจาก 25 และ 30 รอบ ตามคำแนะนำในคู่มือการใช้งาน เป็น 22 และ 27 รอบ ตามลำดับ การใช้ตัวอย่างจากแผ่น FTA โดยตรงที่ผ่านการลดขั้นตอนการล้าง มีคุณภาพ STR profile ไม่แตกต่างกับการใช้สารละลายดีเอ็นเอ โดยคุณภาพของ STR profile ที่ตรวจวิเคราะห์ได้อย่างประสบความสำเร็จแบบ full profile จากเครื่องหมายพันธุกรรม X-STR และ Y-STR เป็นร้อยละ 98 และ 94 ของตัวอย่างเพศหญิงและเพศชายอย่างละ 50 ตัวอย่าง ตามลำดับ โดยสรุปผลการวิจัยครั้งนี้แสดงให้เห็นว่า สามารถลดปริมาตรของชุดน้ำยาสำเร็จรูป และลดจำนวนรอบได้โดยให้ผล DNA profile ที่สมบูรณ์ ซึ่งเป็นการประหยัดค่าใช้จ่ายและลดเวลาการตรวจวิเคราะห์ วิธีการนี้สามารถประยุกต์ใช้ในการบริหารจัดการด้านงานบริการของห้องปฏิบัติการนิติพันธุศาสตร์ได้ 

คำสำคัญ : เครื่องหมาย STR บนโครโมโซมเอกซ์และวาย; เยื่อบุกระพุ้งแก้ม; ลดปริมาตรน้ำยาสำเร็จรูป; นิติพันธุศาสตร์

Abstract

This study involved the validation of commercial test kits on X and Y STR loci using buccal cells on FTA cards. The objectives were to reduce the amplification kit volume, PCR cycles and FTA washing step. The results showed that the amplification kit volume of X-STR and Y-STR were reduced to 25 and 20 %, respectively. The amplification cycles were reduced from 25 cycles and 30 cycles of the manufacturer recommendation to 22 and 27 cycles, respectively. In addition direct amplification of FTA cards with reduced washing step gave the same results as using DNA solution with standard washing step. These results demonstrated that successful STR full profiles of X-STR and Y-STR were 98 and 94 % of total female and male samples (n = 50 each), respectively. For summary, the current study demonstrated that the amplification kit volume and amplification cycles could be reduced while complete DNA profiles were obtained. This will provide benefit of cost reduction and save time. Moreover, it can be applied to forensic DNA routine service management. 

Keywords: X and Y-STR; buccal cell; reduced reaction volume; forensic genetics