วิธีไฮโดรฟิลลิกอินเตอร์แอคชั่นลิควิดโครมาโทกราฟีแบบใหม่ที่ปราศจากการเตรียมอนุพันธ์สำหรับหาปริมาณฟีนิลอะลานีนและไทโรซีน
Article Sidebar
Main Article Content
บทคัดย่อ
งานวิจัยนี้ได้เสนอวิธีใหม่สำหรับการหาปริมาณฟีนิลอะลานีนและไทโรซีนแบบปราศจากการเตรียมอนุพันธ์ ด้วยเทคนิคไฮโดรฟิลลิกอินเตอร์แอคชั่นลิควิดโครมาโทกราฟี (hydrophilic interaction liquid chromatography, HILIC) โดยแยกแบบ HILIC ด้วยการ์ดคอลัมน์ (3 มิลลิเมตร x 10 มิลลิเมตร x 3 ไมโครเมตร) และคอลัมน์สำหรับวิเคราะห์ (3 มิลลิเมตร x 150 มิลลิเมตร x 3 ไมโครเมตร) ที่มีวัฏภาคนิ่ง คือ หมู่ไดไฮดรอกซีโพรพิวที่สร้างพันธะกับซิลิกาเจล วัฏภาคเคลื่อนที่ประกอบด้วยอะซิโตไนไตรล์ : 50 mM แอมโมเนียมฟอร์เมต pH 3 อัตราส่วน 84 : 16 (v/v) ที่อัตราการไหล 0.8 มิลลิลิตรต่อนาที ฟีนิลอะลานีนและอัลฟา-เมทิลฟีนิลอะลานีน (สารมาตรฐานภายใน) ตรวจวัดที่ความยาวคลื่น 210 นาโนเมตร และไทโรซีนที่ 225 นาโนเมตร กราฟมาตรฐานภายในมีความเป็นเส้นตรงในช่วง 1-500 มิลลิกรัมต่อลิตร (r2 = 0.9999) ขีดจำกัดการตรวจวัดของฟีนิลอะลานีนและไทโรซีน 0.7 และ 0.3 มิลลิกรัมต่อลิตร ตามลำดับ ขีดจำกัดการหาปริมาณของฟีนิลอะลานีนและไทโรซีน 1 และ 0.8 มิลลิกรัมต่อลิตร ตามลำดับ แล้วนำวิธีที่พัฒนาขึ้นไปวิเคราะห์ปริมาณฟีนิลอะลานีนและไทโรซีนในตัวอย่างผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร 8 ตัวอย่าง พบว่าอยู่ในช่วง 149-577 และ 396-499 มิลลิกรัมต่อแคปซูล ซึ่งมีค่าร้อยละการกลับคืนอยู่ในช่วง 95-102 และ 97-102 ตามลำดับ ข้อดีของวิธีที่พัฒนาขึ้นนี้ คือ ง่าย สามารถวิเคราะห์ตัวอย่างพร้อมกันอย่างรวดเร็ว (ภายใน 4.5 นาที) และเหมาะสำหรับการนำไปใช้ควบคุมคุณภาพในอุตสาหกรรมยาและผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร
Article Details
เอกสารอ้างอิง
Foods Highest in Phenylalanine, Available Source: https://nutritiondata.self.com/foods-000086000000000000000-1.html, August 1, 2019.
Showing Metabocard for L-Phenylalanine (HMDB0000159), Available Source: http://www.hmdb.ca/metabolites/HMDB0000159, May 12, 2018.
Glushakov, A.V., Dennis, D.M., Sumners, C., Seubert, C.N. and Martynyuk, A.E., 2003, L-phenylalanine selectively depresses currents at glutamatergic excitatory synapses, J. Neurosci. Res. 72: 116-124.
Wendisch, V.F., 2007, Amino Acid Biosynthesis – Pathways, Regulation and Metabolic Engineering, Springer, Berlin, Heidelberg, 413 p.
Arn, P.H., 2014, Encyclopedia of the Neurological Sciences, Volume 3, 2nd Ed., Academic Press, Oxford, 887 p.
Allard, P., Cowell, L.D., Zytkovicz, T.H., Korson, M.S. and Ampola, M.G., 2004, Determination of phenylalanine and tyrosine in dried blood specimens by ion-exchange chromatography using the Hitachi L-8800 analyzer, Clin. Biochem. 37: 857-862.
Boucher, J.L., Charret, C., Coudray-Lucas, C., Giboudeau, J. and Cynober, L., 1997, Amino acid determination in biological fluids by automated ion-exchange chromatography: Performance of Hitachi L-8500A, Clin. Chem. 43: 1421-1428.
Dale, Y., Mackey, V., Mushi, R., Nyanda, A., Maleque, M. and Ike, J., 2003, Simulta neous measurement of phenylalanine and tyrosine in phenylketonuric plasma and dried blood by high-performance liquid chromatography, J. Chromatogr. B 788: 1-8.
Palego, L., Giannaccini, G. and Lucacchini, A., 2012, RP-LC of Phenylthiocarbamyl Amino Acid Adducts in Plasma Acetonitrile Extracts: Use of Multiple Internal Standards and Variable Wavelength UV Detection, pp. 201-217, In Alterman, M.A. and Hunziker, P. (Eds.), Amino Acid Analysis: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Humana Press, Totowa, New Jersey.
Narayan, S.B., Ditewig-Meyers, G., Graham, K.S., Scott, R. and Bennett M.J., 2011, Clin.
Chem. Lab Med. 49: 1177-1185.
Schwarz, E.L., Roberts, W.L. and Pasquali, M., 2005, Analysis of plasma amino acids by HPLC with photodiode array and fluorescence detection, Clin. Chim. Acta 354: 83-90.
Namera, A., Yashiki, M., Nishida, M. and Kojima, T., 2002, Direct extract derivatiza tion for determination of amino acids in human urine by gas chromatography and mass spectrometry, J. Chromatogr. B 776: 49-55.
Deng, C., Deng, Y., Wang, B. and Yang, X., 2002, Gas chromatography-mass spectro metry method for determination of phenylalanine and tyrosine in neonatal blood spots, J. Chromatogr. B 780: 407-413.
Xiong, X., Sheng, X., Liu, D., Zeng, T., Peng, Y. and Wang, Y., 2015, A GC/MS-based metabolomic approach for reliable diagnosis of phenylketonuria, Anal. Bioanal. Chem. 407: 8825-8833.
Buszewski, B. and Noga, S., 2012, Hydrophilic interaction liquid chromato graphy (HILIC) – a powerful separation technique, Anal. Bioanal. Chem. 402: 231-247.
Heaton, J. and Smith, N., 2012, Advan tages and disadvantages of HILIC: A brief overview, Chromatogr. Today. 5: 44-47.
The Association of Analytical Communities, 2012, Appendix K: Guidelines for Dietary Supplements and Botanicals, Part I: AOAC Guidelines for Single-Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals, AOAC International, 1-15 p.
