บทบาทของ Blood Agar ในการแสดงลักษณะฟีโนไทป์ของเชื้อราก่อโรคในมนุษย์: การเปรียบเทียบสัณฐานวิทยาและการเจริญกับ Sabouraud Dextrose Agar
Article Sidebar
Main Article Content
บทคัดย่อ
แม้จะมีความก้าวหน้าของเทคโนโลยีการวินิจฉัยสมัยใหม่ แต่การวินิจฉัยเชื้อราก่อโรคในมนุษย์ยังคงต้องอาศัยการเพาะเลี้ยงเชื้อ การประเมินลักษณะทางสัณฐานวิทยา และการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์เป็นหลัก โดยมี Sabouraud Dextrose Agar (SDA) เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อมาตรฐานสำหรับการศึกษาสัณฐานวิทยา อย่างไรก็ตาม Blood agar เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐานที่ใช้แพร่หลายในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาคลินิก และอาจเป็นอาหารชนิดแรกที่ตรวจพบเชื้อราโดยไม่ได้คาดหมาย การทำความเข้าใจฟีโนไทป์ที่เชื้อราแสดงบน Blood agar จึงอาจช่วยให้ผู้ปฏิบัติงานตระหนักถึงความแปรผันที่ขึ้นกับอาหารเลี้ยงเชื้อและลดความคลาดเคลื่อนในการแปลผลเบื้องต้น
การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อเปรียบเทียบอัตราการเจริญและลักษณะสัณฐานวิทยาของเชื้อราก่อโรคในมนุษย์กลุ่มต่าง ๆ บน SDA และ Blood agar ครอบคลุม yeasts, dermatophytes, hyaline molds, dematiaceous molds, thermally dimorphic molds, non-septate molds, neglected molds และ entomopathogenic mold โดยปรับปริมาณเชื้อเริ่มต้นให้ใกล้เคียงกัน บ่มยีสต์ที่ 37 องศาเซลเซียส และราเส้นใยที่ 25 องศาเซลเซียส จากนั้นประเมินอัตราการเจริญ ลักษณะโคโลนี สีด้านหน้า สีด้านหลัง และโครงสร้างจุลทรรศน์
ผลการศึกษาพบว่าเชื้อราส่วนใหญ่เจริญบน Blood agar ได้ แต่ SDA แสดง pigment, reverse morphology และโครงสร้างสร้างสปอร์ได้ชัดเจนกว่าใน mold หลายชนิด ขณะที่ Blood agar ทำให้เห็น foot-like projections ใน Candida albicans, mucoid colony ใน Cryptococcus gattii และเพิ่มการแผ่ขยายหรือการเจริญของ Candida tropicalis, Pichia kudriavzevii, Microsporum canis และ Aspergillus niger
สรุปได้ว่า SDA ยังคงเป็นอาหารเลี้ยงเชื้อมาตรฐานหลักสำหรับการประเมินสัณฐานวิทยาของเชื้อรา ส่วน Blood agar สามารถใช้เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อทางเลือกเพิ่มเติม ซึ่งช่วยเผยให้เห็นลักษณะฟีโนไทป์ที่จำเพาะเจาะจง การประยุกต์ใช้นี้จึงมีส่วนช่วยส่งเสริมทักษะการสังเกตทางสัณฐานวิทยา การอ่านผลและการวิเคราะห์ผลวินิจฉัยเชื้อราก่อโรคที่มักพบในกระบวนการตรวจทางจุลชีววิทยาคลินิก
Article Details
เอกสารอ้างอิง
[1] Donnelly, J.P., Chen, S. C., Kauffman, C.A., Steinbach, W.J., Baddley, J.W., Verweij, P.E., Clancy, C.J., Wingard, J.R., Lockhart, S.R., Groll, A.H., Sorrell, T.C., Bassetti, M., Akan, H., Alexander, B.D., Andes, D., Azoulay, E., Bialek, R., Bradsher, R.W., Bretagne, S., Calandra, T., Caliendo, A.M., Castagnola, E., Cruciani, M., Cuenca-Estrella, M., Decker, C.F., Desai, S.R., Fisher, B., Harrison, T., Heussel, C.P., Jensen, H.E., Kibbler, C.C., Kontoyiannis, D.P., Kullberg, B.J., Lagrou, K., Lamoth, F., Lehrnbecher, T., Loeffler, J., Lortholary, O., Maertens, J., Marchetti, O., Marr, K.A., Masur, H., Meis, J.F., Morrisey, C.O., Nucci, M., Ostrosky-Zeichner, L., Pagano, L., Patterson, T.F., Perfect, J.R., Racil, Z., Roilides, E., Ruhnke, M., Prokop, C.S., Shoham, S., Slavin, M.A., Stevens, D.A., Thompson, G.R., Vazquez, J.A., Viscoli, C., Walsh, T.J., Warris, A., Wheat, L.J., White, P.L., Zaoutis, T.E. and Pappas, P. G., 2020, Revision and Update of the Consensus Definitions of Invasive Fungal Disease From the European Organization for Research and Treatment of Cancer and the Mycoses Study Group Education and Research Consortium, Clin. Infect. Dis. 71(6): 1367–76. https://doi.org/10.1093/cid/ciz1008.
[2] Bupha-Intr, O., Butters, C., Reynolds, G., Kennedy, K., Meyer, W., Patil, S., Bryant, P., Morrissey, C. O., and Australasian Antifungal Guidelines Steering Committee, 2021, Consensus guidelines for the diagnosis and management of invasive fungal disease due to moulds other than Aspergillus in the haematology/oncology setting, Intern. Med. J. 51 Suppl 7: 177–219. https://doi.org/10.1111/imj.15592.
[3] Knoll, M.A., Steixner, S., Lass-Flörl, C., 2023, How to use direct microscopy for diagnosing fungal infections, Clin. Microbiol. Infect. 29(8): 1031-8. https://doi.org/10.1016/j.cmi.2023.05.012.
[4] Borman, A.M., Mohammed, S., Palmer, M.D., Childs, N. and Johnson, E.M., 2022, The importance of appropriate processing and direct microscopic examination for the timely diagnosis and management of invasive infections caused by filamentous fungi, Med. Mycol. 60(12): myac081. https://doi.org/10.1093/mmy/myac081.
[5] Chen, H., Zhou, X., Ren, B. and Cheng, L., 2020, The regulation of hyphae growth in Candida albicans, Virulence. 11(1): 337–48. https://doi.org/10.1080/21505594.2020.1748930.
[6] Villa, S., Hamideh, M., Weinstock, A., Qasim, M.N., Hazbun, T.R., Sellam, A., Hernday, A.D. and Thangamani, S., 2020, Transcriptional control of hyphal morphogenesis in Candida albicans, FEMS Yeast Res. 20(1): foaa005. https://doi.org/10.1093/femsyr/foaa005.
[7] Chow, E.W.L., Pang, L.M. and Wang, Y., 2021, From Jekyll to Hyde: The Yeast-Hyphal Transition of Candida albicans, Pathogens (Basel, Switzerland). 10(7): 859. https://doi.org/10.3390/pathogens10070859.
[8] Talapko, J., Juzbašić, M., Matijević, T., Pustijanac, E., Bekić, S., Kotris, I. and Škrlec, I., 2021, Candida albicans-The Virulence Factors and Clinical Manifestations of Infection, J. Fungi (Basel, Switzerland). 7(2): 79. https://doi.org/10.3390/jof7020079.
[9] Ciurea, C.N., Kosovski, I.B., Mare, A.D., Toma, F., Pintea-Simon, I.A. and Man, A., 2020, Candida and Candidiasis-Opportunism Versus Pathogenicity: A Review of the Virulence Traits, Microorganisms. 8(6): 857. https://doi.org/10.3390/microorganisms8060857.
[10] Richardson, J.P., 2022, Candida albicans: A Major Fungal Pathogen of Humans, Pathogens. 11(4): 459. https://doi.org/10.3390/pathogens11040459.
[11] Chang, C.C., Harrison, T.S., Bicanic, T.A., Chayakulkeeree, M., Sorrell, T.C., Warris, A., Hagen, F., Spec, A., Oladele, R., Govender, N.P., Chen, S.C., Mody, C.H., Groll, A.H., Chen, Y.C., Lionakis, M.S., Alanio, A., Castañeda, E., Lizarazo, J., Vidal, J.E., Takazono, T., Hoenigl, M., Alffenaar, J.W., Gangneux, J.P., Soman, R., Zhu, L.P., Bonifaz, A., Jarvis, J.N., Day, J.N., Klimko, N., Salmanton-García, J., Jouvion, G., Meya, D.B., Lawrence, D., Rahn, S., Bongomin, F., McMullan, B.J., Sprute, R., Nyazika, T.K., Beardsley, J., Carlesse, F., Heath, C.H., Ayanlowo, O.O., Mashedi, O.M., Queiroz-Telles, Filho. F., Hosseinipour, M.C., Patel, A.K., Temfack, E., Singh, N., Cornely, O.A., Boulware, D.R., Lortholary, O., Pappas, P.G. and Perfect, J.R., 2024, Global guideline for the diagnosis and management of cryptococcosis: an initiative of the ECMM and ISHAM in cooperation with the ASM, Lancet. Infect. Dis. 24(8): e495-e512. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(23)00731-4. Epub 2024 Feb 9. Erratum in: Lancet. Infect. Dis. 24(8): e485. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(24)00426-2.
[12] Oliveira, L.S.S., Pinto, L.M., de Medeiros, M.A.P., Toffaletti, D.L., Tenor, J.L., Barros, T.F., Neves, R.P., Neto, R.G.L., Milan, E.P., Padovan, A.C.B., Rocha, W.P.D.S., Perfect, J.R. and Chaves, G.M., 2021, Comparison of Cryptococcus gattii/neoformans Species Complex to Related Genera (Papiliotrema and Naganishia) Reveal Variances in Virulence Associated Factors and Antifungal Susceptibility, Front. Cell. Infect. Microbiol. 11: 642658. https://doi.org/10.3389/fcimb.2021.642658.
[13] Saidykhan, L., Onyishi, C.U. and May, R.C., 2022, The Cryptococcus gattii species complex: Unique pathogenic yeasts with understudied virulence mechanisms, PLoS Neglected Trop. Dis.16(12): e0010916. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0010916.
[14] Al-Huthaifi, A.M., Radman, B.A., Al-Alawi, A.A., Mahmood, F. and Liu, T.B., 2024, Mechanisms and Virulence Factors of Cryptococcus neoformans Dissemination to the Central Nervous System, J. Fungi (Basel, Switzerland). 10(8): 586. https://doi.org/10.3390/jof10080586.
[15] Sprute, R., Cornely, O.A., Chen, S.C., Seidel, D., Schuetz, A.N. and Zhang, S.X., 2021, All You Need To Know and More about the Diagnosis and Management of Rare Yeast Infections, mBio. 12(4): e0159421. https://doi.org/10.1128/mBio.01594-21.
[16] Segal, E., and Elad, D., 2021, Human and Zoonotic Dermatophytoses: Epidemiological Aspects, Front. Microbiol. 12: 713532. https://doi.org/10.3389/fmicb.2021.713532.
[17] Getso, M.I., Hashemi, S.J., Ghazvini, R.D., Yusuf, S.M., Khodavaisy, S., Gerami-Shoar, M., Kibiya, F.S., Aliyu, U.T., Sarvestani, H.K. and Aliyu, M., 2021, Determination of dermatophytes isolated from tinea capitis using conventional and ITS-based sequencing methods in Kano, Nigeria, J. Mycol. Med. 31(3): 101157. https://doi.org/10.1016/j.mycmed.2021.101157.
[18] Jacobs, S.E., Wengenack, N.L. and Walsh, T.J., 2020, Non-Aspergillus Hyaline Molds: Emerging Causes of Sino-Pulmonary Fungal Infections and Other Invasive Mycoses, Semin. Respir. Crit. Care Med. 41(1): 115–30. https://doi.org/10.1055/s-0039-3401989.
[19] Morrissey, C.O., Kim, H.Y., Duong, T.N., Moran, E., Alastruey-Izquierdo, A., Denning, D.W., Perfect, J.R., Nucci, M., Chakrabarti, A., Rickerts, V., Chiller, T.M., Wahyuningsih, R., Hamers, R.L., Cassini, A., Gigante, V., Sati, H., Alffenaar, J.W. and Beardsley, J., 2024, Aspergillus fumigatus-a systematic review to inform the World Health Organization priority list of fungal pathogens, Med. Mycol. 62(6): myad129. https://doi.org/10.1093/mmy/myad129.
[20] Hoenigl, M., Salmanton-García, J., Walsh, T.J., Nucci, M., Neoh, C.F., Jenks, J.D., Lackner, M., Sprute, R., Al-Hatmi, A.M.S., Bassetti, M., Carlesse, F., Freiberger, T., Koehler, P., Lehrnbecher, T., Kumar, A., Prattes, J., Richardson, M., Revankar, S., Slavin, M.A., Stemler, J., Spiess B., Taj-Aldeen, S.J., Warris, A., Woo, P.C.Y., Young, J.H., Albus, K., Arenz, D., Arsic-Arsenijevic, V., Bouchara, J.P., Chinniah, T.R., Chowdhary, A., de Hoog, G.S., Dimopoulos, G.,, Duarte R.F., Hamal, P., Meis, J.F., Mfinanga, S., Queiroz-Telles, F., Patterson, T.F., Rahav, G., Rogers, T.R., Rotstein, C., Wahyuningsih, R., Seidel, D. and Cornely OA., 2021, Global guideline for the diagnosis and management of rare mould infections: an initiative of the European Confederation of Medical Mycology in cooperation with the International Society for Human and Animal Mycology and the American Society for Microbiology, Lancet. Infect. Dis. 21(8): e246–e57. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30784-2.
[21] Hoenigl, M., Levitz, S.M., Schuetz, A.N., Zhang, S.X. and Cornely, O.A., 2021, All You Need to Know and More about the Diagnosis and Management of Rare Mold Infections, mBio. 12(1): e02920-20. https://doi.org/10.1128/mBio.02920-20.
[22] Skiada, A., Pavleas, I. and Drogari-Apiranthitou, M., 2020, Epidemiology and Diagnosis of Mucormycosis: An Update, J. Fungi. (Basel, Switzerland). 6(4): 265. https://doi.org/10.3390/jof6040265f6040265.
[23] Pham, D., Howard-Jones, A.R., Sparks, R., Stefani, M., Sivalingam, V., Halliday, C.L., Beardsley, J. and Chen, S.C, 2023, Epidemiology, Modern Diagnostics, and the Management of Mucorales Infections, J. Fungi (Basel, Switzerland). 9(6): 659. https://doi.org/10.3390/jof9060659.
[24] Abdillah, A., Khelaifia, S., Raoult, D., Bittar, F. and Ranque, S., 2020, Comparison of Three Skin Sampling Methods and Two Media for Culturing Malassezia Yeast, J. Fungi (Basel, Switzerland). 6(4): 350. https://doi.org/10.3390/jof6040350.
[25] Abdillah, A. and Ranque, S., 2021, MalaSelect: A Selective Culture Medium for Malassezia Species. J. Fungi. (Basel, Switzerland). 7(10): 824. https://doi.org/10.3390/jof7100824.
[26] Atsü, N., Ergin, Ç., Caf, N., Türkoğlu, Z., Döğen, A. and İlkit, M., 2022, Effectiveness of FastFung agar in the isolation of Malassezia furfur from skin samples, Mycoses. 65(7): 704–8. https://doi.org/10.1111/myc.13450.
[27] Roth, M., Daas, L., MacKenzie, C.R., Balasiu, A., Stachon, T., Neumann, I., Steindor, F., Seitz, B. and Geerling, G., 2020, Development and Assessment of a Simulator for in Vivo Confocal Microscopy in Fungal and Acanthamoeba Keratitis, Curr. Eye Res. 45(12): 1484–9. https://doi.org/10.1080/02713683.2020.1772830.
[28] Chandler, D., 2022, Direct microscopy in the dermatology clinic: enhancing the management of skin infections and infestations, Clin. Exp. Dermatol. 47(6): 1023-9. https://doi.org/10.1111/ced.151185118.
[29] Cornely, O.A., Sprute, R., Bassetti, M., Chen, S.C., Groll, A.H., Kurzai, O., Lass-Flörl, C., Ostrosky-Zeichner, L., Rautemaa-Richardson, R., Revathi, G., Santolaya, M.E., White, P.L., Alastruey-Izquierdo, A., Arendrup, M.C., Baddley, J., Barac, A., Ben-Ami, R., Brink, A.J., Grothe, J.H., Guinea, J., Hagen, F., Hochhegger, B., Hoenigl, M., Husain, S., Jabeen, K., Jensen, H.E., Kanj, S.S., Koehler, P., Lehrnbecher, T., Lewis, R.E., Meis, J.F., Nguyen, M.H., Pana, Z.D., Rath, P.M., Reinhold, I., Seidel, D., Takazono, T., Vinh, D.C., Zhang, S.X., Afeltra, J., Al-Hatmi, A.M.S., Arastehfar, A., Arikan-Akdagli, S., Bongomin, F., Carlesse, F., Chayakulkeeree, M., Chai, L.Y.A., Chamani-Tabriz, L., Chiller, T., Chowdhary, A., Clancy, C.J., Colombo, A.L., Cortegiani, A., Corzo Leon, D.E., Drgona, L., Dudakova, A., Farooqi, J., Gago, S., Ilkit, M., Jenks, J.D., Klimko, N., Krause, R., Kumar, A., Lagrou, K., Lionakis, MS., Lmimouni, B.E., Mansour, M.K., Meletiadis, J., Mellinghoff, S.C., Mer, M, Mikulska, M., Montravers, P., Neoh, C.F., Ozenci, V., Pagano, L., Pappas, P., Patterson, T.F., Puerta-Alcalde, P., Rahimli, L., Rahn, S., Roilides, E., Rotstein, C., Ruegamer, T., Sabino, R., Salmanton-García, J., Schwartz, I.S., Segal, E., Sidharthan, N., Singhal, T., Sinko, J., Soman, R., Spec, A., Steinmann, J., Stemler, J., Taj-Aldeen, S.J., Talento, A.F., Thompson, G.R. 3rd, Toebben, C., Villanueva-Lozano, H., Wahyuningsih, R., Weinbergerová, B., Wiederhold, N., Willinger, B., Woo, P.C.Y., Zhu, L.P., 2025, Global guideline for the diagnosis and management of candidiasis: an initiative of the ECMM in cooperation with ISHAM and ASM, Lancet. Infect. Dis. 25(5): e280–93. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(24)00749-7.
[30] Kruithoff, C., Gamal, A., McCormick, T.S. and Ghannoum, M.A, 2023, Dermatophyte Infections Worldwide: Increase in Incidence and Associated Antifungal Resistance, Life (Basel, Switzerland). 14(1): 1. https://doi.org/10.3390/life14010001.