Allele-Specific PCR Development for CYP2C9 Genotyping การพัฒนาเครื่องหมาย allele-specific PCR เพื่อระบุจีโนไทป์ของยีน CYP2C9
Article Sidebar
Main Article Content
บทคัดย่อ
CYP2C9 เป็นเอนไซม์ที่มีผลต่อเภสัชจลนศาสตร์ของยาวาร์ฟาริน ซึ่งยาวาร์ฟารินเป็นยาต้านการแข็งตัวของเลือดที่มีช่วงการรักษาแคบ เนื่องจากภาวะพหุสัณฐานทางพันธุกรรมของยีน CYP2C9 มีผลต่อการตอบสนองต่อยาสูง และความหลากหลายทางพันธุกรรมของยีน CYP2C9 ที่มีผลต่อระดับยาวาร์ฟารินในเลือด ได้แก่ CYP2C9*2 (rs1799853) และ CYP2C9*3 (rs1057910) ปัจจุบันเทคนิคที่นิยมใช้ระบุความหลากหลายทางพันธุกรรม คือเทคนิค PCR-RFLP และ real-time PCR ซึ่งทั้งสองเทคนิคเป็นวิธีการที่มีราคาแพง มีหลายขั้นตอนและใช้ระยะเวลานาน คณะผู้วิจัยจึงพัฒนาเทคนิค allele-specific polymerase chain reaction (AS-PCR) สำหรับระบุจีโนไทป์ของยีน CYP2C9 โดยผลผลิตพีซีอาร์ที่คาดหวังของ CYP2C9*2 คือ แถบไวลด์ไทป์ แถบกลายพันธุ์ และแถบควบคุมมีขนาด 154 230 และ 346 คู่เบสตามลำดับ ส่วนผลผลิตพีซีอาร์ที่คาดหวังของ CYP2C9*3 คือ แถบไวลด์ไทป์ แถบกลายพันธุ์ และแถบควบคุมมีขนาด 128 200 และ 289 คู่เบสตามลำดับ การหาสภาวะที่เหมาะสมของปฏิกิริยาพีซีอาร์ใช้อุณหภูมิ annealing และความเข้มข้นของ MgCl2 แตกต่างกัน พบว่า อุณหภูมิ annealing ที่ 65 องศาเซลเซียส และความเข้มข้นของ MgCl2 1.25 มิลลิโมลาร์ เป็นสภาวะที่เหมาะสม และยืนยันลำดับนิวคลิโอไทด์ด้วย Sanger DNA sequencing สรุปได้ว่าเทคนิค AS-PCR ที่พัฒนาขึ้นเป็นวิธีที่ทำได้รวดเร็ว ทำได้ง่ายและมีต้นทุนต่ำ ซึ่งสามารถระบุความหลากหลายทางพันธุกรรมของยีน CYP2C9 เพื่อใช้ในการพิจารณาปรับขนาดยาวาร์ฟารินที่เหมาะสมสำหรับการรักษาได้
Article Details
เนื้อหาและข้อมูลในบทความที่ลงตีพิมพ์ในวารสารวิชชา มหาวิทยาลัยราชภัฏนครศรีธรรมราช ถือเป็นข้อคิดเห็นและความรับผิดชอบของผู้เขียนบทความโดยตรง ซึ่งกองบรรณาธิการวารสารไม่จำเป็นต้องเห็นด้วยหรือร่วมรับผิดชอบใด ๆ
บทความ ข้อมูล เนื้อหา รูปภาพ ฯลฯ ที่ได้รับการตีพิมพ์ในวารสารวิชชา มหาวิทยาลัยราชภัฏนครศรีธรรมราช ถือเป็นลิขสิทธ์ของวารสารวิชชา มหาวิทยาลัยราชภัฏนครศรีธรรมราช หากบุคคลหรือหน่วยงานใดต้องการนำข้อมูลทั้งหมดหรือส่วนหนึ่งส่วนใดไปเผยแพร่ต่อหรือเพื่อการกระทำการใด ๆ จะต้องได้รับอนุญาตเป็นลายลักษณ์อักษรจากวารสารวิชชา มหาวิทยาลัยราชภัฏนครศรีธรรมราชก่อนเท่านั้น
The content and information in the article published in Wichcha journal Nakhon Si Thammarat Rajabhat University, It is the opinion and responsibility of the author of the article. The editorial journals do not need to agree. Or share any responsibility.
เอกสารอ้างอิง
ชลภัทร สุขเกษม. (2554). การประยุกต์ใช้ตัวบ่งชี้ทางเภสัชพันธุศาสตร์เพื่อการปรับขนาดยาในเวชปฏิบัติ. จุฬาลงกรณ์เวชสาร, 55(1), 39-53.
นิตย์สุภา วัฒนชัย และสุทธิดา แก้วมุงคุณ. (2560). เภสัชวิทยาและปัจจัยที่มีผลต่อการตอบสนองของยาวาร์ฟาริน. ศรีนครินทร์เวชสาร, 32(2), 189-199.
สมาคมแพทย์โรคหัวใจแห่งประเทศไทย ในพระบรมราชูปถัมภ์. (2553). แนวทางการรักษาผู้ป่วยด้วยยาต้านการแข็งตัวของเลือดชนิดรับประทาน. สืบค้นเมื่อ 1 มกราคม 2563. จาก: http://www.thaiheart.org/images/column_1292154183/warfarin_Guideline%281%29.pdf.
สุทธิดา แก้วมุงคุณ นิตย์สุภา วัฒนชัย และวิจิตรา ทัศนียกุล. (2559). ปัจจัยทางคลินิกและปัจจัยทางสิ่งแวดล้อมที่มีผลต่อการรักษาด้วยยาวาร์ฟารินในขนาดคงที่. ใน การประชุมวิชาการเสนอผลงานวิจัยบัณฑิตศึกษา ระดับชาติและนานาชาติ. ขอนแก่น.
Goldhaber, S.Z., Weitz, J.I. and Piazza, G. (2013). Pulmonary embolism. in creager, M.A., Beckman, J.A., Loscalzo J. (Eds.), Vascular Medicine: A Companion to Braunwald’s Heart Disease, pp. 627-638. Boston: Saunders Elsevier.
Maneechay, W., Chittithavorn, V., Lertlam, L., Sirisathienrooch, T., Duangpakdee, P. and Sangkhathat, S. (2017). Genotype distributions of CYP2C9 and VKORC1 in southern Thais and their association with warfarin maintenance dose in patients with cardiac surgery. Asian Biomedicine, 11(1), 81-87.
Wangkumhang, P., Chaichoompu, K., Ngamphiw, C., Ruangrit, U., Chanprasert, J., Assawamakin, A. and Tongsima, S. (2007). WASP: a web-based allele-specific PCR assay designing tool for detecting SNPs and mutations. BMC Genomics, 8(275), doi:10.1186/1471-2164/8/275.
Wattanachai, N., Kaewmoongkun, S., Pussadhamma, B. Makarawate, P., Wongvipaporn, C., Kiatchoosakun, S., Vannaprasaht, S. and Tassaneeyakul, W. (2017). The impact of non-genetic and genetic factors on a stable warfarin dose in Thai patients. The European Journal of Clinical Pharmacology, 73, 973-980
Park, Y.H. and Kohel, R.J. (1994). Effect of concentration of MgCl2 on random-amplified DNA polymorphism. Biotechniques, 16(4), 652-656.
Tyagi, A.K., Khoshbeen, M.B., Curtis, P.H., Uppugunduri, C.R.S. and Ansar, M. (2018). Development and validation of an allele-specific PCR assay for genotyping a promoter and exonic single nucleotide polymorphisms of MGMT gene. Journal of Biological Methods, 5(2), doi: 10.14440/jbm.2018.224.
