Protoplast Isolation and Culture of <I> Rhynchostylis gigantea </I> var. <I> rubrum </I> Sagarik
Article Sidebar
Main Article Content
Abstract
In this experiment, isolation of protoplasts from leaves of in vitro-grown Chang Daeng orchid (Rhynchostylis gigantea var. rubrum Sagarik) was carried out using various types and concentrations of enzymes and osmoticum. The results showed that 2% (w/v) cellulase Onozuka R-10, 2% (w/v) macerozyme R-10 and 0.5% (w/v) driselase dissolved in 0.75 M mannitol, incubated under darkness for 6 hours gave the highest number of protoplasts (1.28 x 106/gram fresh weight) and viability (92-95%). Culture of the protoplasts at density of 5 x 105 protoplasts/ml in liquid MS medium supplemented with 1 mg/l 2, 4-D, 1 mg/l KN, 3% sucrose and 0.75 M mannitol promoted the highest survival rate. Only protoplasts anthocyanin containing underwent cell division and development. However, development of the protoplasts into callus and plantlet was not observed. Factors effecting protoplast regeneration will be further studied.
Article Details
References
จิตเกษม เที่ยงจิตต์ และ สุเม อรัญนารถ. 2547. การชักนำแคลลัสจากโปรโตพลาสต์ของบัวหลวง พันธุ์บุณฑริก. วารสารวิทยาศาสตร์เกษตร 35: 19-23.
พัฐวดี ทองสีดำ. 2536. การแยกและเลี้ยงโปรโตพลาสต์อะแรนด้า. วิทยานิพนธ์วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต. มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์, สงขลา.
บุญยืน กิจวิจารณ์. 2540. เทคโนโลยีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช. ภาควิชาชีววิทยา คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น, ขอนแก่น. 207 หน้า.
สกุลรัตน์ แสนปุตะวงษ์. 2549. เทคนิคการแยกและการเพาะเลี้ยงโปรโตพลาสต์จากใบกล้วยไม้ เหลืองจันทบูร (Dendrobium friedericksianum Rchb.f.) ในหลอดทดลอง. วิทยานิพนธ์วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต.มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์, สงขลา. 72 หน้า.
สมปอง เตชะโต. 2539. การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืชเศรษฐกิจ หลักการและพืชเศรษฐกิจที่สำคัญ. ภาควิชาพืชศาสตร์ คณะทรัพยากรธรรมชาติ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์, สงขลา. 135 หน้า.
อุทัย จารณศรี. 2548. กล้วยไม้ตัดดอก และกล้วยไม้กระถาง. ข่าวสารสมาคมพืชสวน. สมาคมพืชสวนแห่งประเทศไทย, กรุงเทพฯ.
Evans, D. A. and J. E. Bravo. 1983. Protoplast isolation and culture. pp. 124-176. In: D.A. Evans, W.R. Sharp, P.V. Ammirato and Y. Yamada (eds.). Handbook of Plant Cell Culture. Vol. 1. Macmillan Publishing Company, New York.
Hu, W. -W., S. -M. Wong, C.-S. Loh and C.-J. Goh. 1998. Synergism in replication of Cymbidium mosaicpotexvirus (CymMV) and odontoglossum ringspot tobamovirus (ORSV) RNA in orchid protoplasts. Archives of Virology 143: 1265-1275.
Kunasakdakul, K. and P. Smitamana. 2003. Dendrobium Prathum Red protoplast culture. Thai J. Agric. Sci. 36: 1-8.
Loh, C.-S. and A.N. Rao. 1985. Isolation and culture of mesophyll protoplasts of Aranda Noorah Alsagoff. Malayan Orchid Review 19: 34-37.
Sajise, J.U. and Y. Sagawa. 1991. Regeneration of plantlets from callus and protoplasts of Phalaenopsis sp. Malayan Orchid Bull. 5: 23-28.
Te-chato, S. A. Hilae and L. Moosikapala, 2005. Microcolony formation from embryogenic callus-derived protoplasts of oil palm. Songklanakarin J. Sci. Technol. 27: 685-691.
Teo, C.K.H. and K.H. Neumann. 1978. The culture of protoplasts isolated from Renantanda Rosalind Cheok. The Orchid Review 86: 156-158.
Theodoropoulos, P. A. and K. A. Roubelakis-Angelakis. 1990. Progress in leaf protoplast isolation and culture from virus-free axenic shoot culture of Vitis vinifera L. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 20: 15-23.
Wallin, A. and T. Eriksson. 1973. Protoplast cultures from suspension of Daucus carota. Physiol. Plant. 28: 33-39.
