การพัฒนาชุดตรวจโรคเต้านมอักเสบในโคนมด้วยชุดตรวจแถบสีอิมมูโนโครมาโตกราฟิกโดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อเชื้อ <I>Staphylococcus aureus</I>

บทคัดย่อ

งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาชุดตรวจแถบสีสำหรับระบุเชื้อก่อโรคเต้านมอักเสบในน้ำนมดิบของแม่โค อาศัยเทคนิคภูมิคุ้มกันวิทยาโดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อเชื้อ Staphylococcus aureus ทำการทดสอบความจำเพาะเจาะจงของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อเชื้อ S. aureus และทดสอบการเกิดปฏิกิริยาข้าม ในเชื้อก่อโรคเต้านมอักเสบกลุ่มอื่น ๆ ได้แก่เชื้อ Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae และ Escherichia coli ด้วยเทคนิคอินไดเรคเอนไซม์ลิงค์อิมมูโนซอร์เบนท์เอสเซ (indirect enzyme-linked immunosorbent assay: indirect - ELISA) ที่จำนวนเชื้อก่อโรค 10⁶, 10⁷, 10⁸ และ 10⁹ CFU / mL พบว่า ระดับความเข้มข้นของโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เหมาะสมในการทำปฏิกิริยาคือ 1: 2,500 สามารถจับกับเชื้อ S. aureus, E. faecalis, S. agalactiae และ E. coli ที่จำนวนเชื้อ 10⁹ CFU/mL ได้เท่ากับ 100, 30, 13 และ 10 % ตามลำดับ เมื่อนำโมโนโคลนอลแอนติบอดีพัฒนาเป็นชุดตรวจแถบสี โดยนำมาติดฉลากกับ colloidal gold ขนาด 40 nm (pH 9.0) สามารถเชื่อมติดกันได้สูงสุดที่ค่าการวัดดูดกลืนแสง 532 nm จากนั้นนำโมโนโคลนอลแอนติบอดี ความเข้มข้น 1 mg / mL ปริมาตร 0.5 µL หยดบนแผ่นกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน ที่ตำแหน่งทดสอบ และหยด goat anti - mouse IgG (H + L) ความเข้มข้น 0.8 mg / mL ปริมาตร 0.5 µL ที่ตำแหน่งควบคุมปฏิกิริยา จากนั้นนำชุดตรวจมาอบแห้งที่อุณหภูมิ 37 ^ºC นาน 14 - 16 ชั่วโมง หลังจากประกอบชุดตรวจทดสอบสำเร็จ จึงนำชุดตรวจไปทดสอบด้วยการหยดตัวอย่างเชื้อก่อโรคชนิดต่าง ๆ ที่จำนวน 10⁹ CFU / mL ในสารละลายบัฟเฟอร์  พบว่า เฉพาะตัวอย่างที่มีเชื้อก่อโรค S. aureus แสดงแถบสีชมพูม่วง ในตำแหน่งควบคุมและตำแหน่งทดสอบ ขณะที่เชื้อก่อโรคชนิดอื่นแสดงแถบสีชมพูม่วงในตำแหน่งควบคุมเท่านั้น ดังนั้นชุดตรวจระบุเชื้อก่อโรคเต้านมอักเสบที่พัฒนาขึ้นนี้เป็นชุดทดสอบที่มีความจำเพาะต่อ S. aureus และใช้เป็นชุดตรวจต้นแบบในระดับห้องปฏิบัติการเพื่อระบุการติดเชื้อ S. aureus ที่รวดเร็วสำหรับวินิจฉัยเชื้อก่อโรคเต้านมอักเสบได้